Denhardt溶液（非同位素探针）

探针制备与非同位素标记新方法

一、概述 近年来核酸杂交技术在分子生物学、临床医学、细胞生物学、分子遗传学等学科领域中应用，得以飞速的发展。基因探针的制备技术及同位素、非同位素标记、检测技术则是基因诊断技术中的关键一环。而从70年代中期以来核酸探针杂交技术就已经在科研和临床中被广泛采用，成为一项直接检查病原体、癌基因和遗传病基因突变的重要手段，而采用的方法主要是用放射性同位素标记的探针来完成。80年代以后人们致力于非同位素标记技术的建立，其中应用最广泛的是生物素标记的核酸探针以及后来发展的以地高辛甙元为标志物，以抗体一酶系统

了解核酸分子杂交

杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针，再与另一种核酸单链进行分子杂交。随着基因工程研究技术的迅猛发展，新的核酸分子杂交类型和方法在不断涌现和完善。核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交两种类型：一、固相杂交将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。由于固相杂交后，未杂交的游离片段可容易地漂洗除去，膜上留下的杂交物容易检测和能防止靶 DNA 自我复性等优点

RNA原位核酸杂交方法

探针和人工合成寡核苷酸探针。 2.  探针的标记 根据标记物可分为同位素标记和非同位素标记。非同位素标记技术目前有生物素，地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶和荧光素。   三、地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交 组织的前处理： 1.  冰冻切片的制备：离体后组织立即取材，1.5 cm×1.2 cm×0.2 cm，放入4%多聚甲醛溶液中（PBS新配制），4℃，固定2-4 h。倒去固定液后，加入30%蔗糖溶液（PBS新配制），4℃过夜，次日