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- 康朗生物
- KL-A072
- 国产/进口
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
86
- 英文名：
副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)单重荧光PCR检测试剂盒
- 保质期：
-18℃以下，有效期6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-18℃以下，有效期6个月
- 规格：
48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对副溶血性弧菌耐热相关溶血素特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对副溶血性弧菌耐热相关溶血素的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)单重荧光PCR检测试剂盒用途：
该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)，用于副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成：(48T)
| 组份 | 数量 | 规格 |
| TRH反应液(TRH-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| TRH阳性对照(TRH -PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列，博日系列及其他荧光定量PCR 检测仪。
五、副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)单重荧光PCR检测试剂盒储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6 个月。
六、样品采集、前处理与DNA 提取
6.1 样品采集
水样便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 样本前处理：
水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购生产的(DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入50uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。
由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)单重荧光PCR检测试剂盒检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(TRH-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 14μL | N×14μL |
| 酶混合液 | 1μL | N×1μL |
| 总量 | 15μL | N×15μL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(TRH-PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(TRH-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明副溶血性弧菌耐热相关溶血素核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明副溶血性弧菌耐热相关溶血素核酸阴性。
(3)如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行副溶血性弧菌耐热相关溶血素qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明副溶血性弧菌耐热相关溶血素核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。 第一节 微生物形态学检查 细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构
。虽然声波强烈地振动可使菌群死亡，但往往有残存者。因此，这种方法在消毒灭菌方面无实用价值。主要用以裂解细胞分离提取细胞组分或制备抗原。超声波灭菌的机理尚不清楚，可能是细菌外表受细微气泡的作用，扰乱细胞内容物及破坏细胞壁致细菌崩解而死亡。 (五)干燥 多数细菌的繁殖体在空气中干燥时很快死亡，例如脑膜炎双球菌、淋球菌、霍乱弧菌、梅毒螺旋体等。有些细菌抗干燥力较强，尤其有蛋白质等物质保护时。例如溶血性链球菌在尘埃中存活25日，结核杆菌在干痰中数月不死。芽胞抵抗力更强，例如炭疽杆菌耐干燥20
，这些假基因有和真基因相同的ORF，但却从不表达（已发现表达的假基因）③RNA水平上遗传信息加工（RNA editing)④蛋白质水平上遗传信息的加工（蛋白质剪接第二章 蛋白质组成及结构1、各种氨基酸的三字母符和单字母符。甘氨酸-Gly,G 亮氨酸-Leu,L丙氨酸-Ala,A 异亮氨酸-Ile,I 缬氨酸-Val,V脯氨酸 Pro,P苯丙氨酸-Phe,F酪氨酸-Tyr,Y色氨酸-Trp,W丝氨酸-Ser,S 半胱氨酸-Cys,C苏氨酸 Thr,T甲硫氨酸-Met,M天冬氨酸-Asp,D谷氨酸-Glu,E
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