蛋白酶抑制剂混合物(细菌蛋白提取用)

特别提示：包括蛋白酶抑制剂混合物(细菌蛋白提取用)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：蛋白酶抑制剂混合物(细菌蛋白提取用)
英文名称：Protease inhibitor cocktail for bacterial cell extracts
产品货号：RFT196
产品规格：1ml|5×1ml

本品是一种用于细菌蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物(20mM AEBSF,2mM Bestatin,0.3mM E64 和 2mM Pepstatin A in DMSO)，并提供独立包装的0.1MEDTA。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。

细菌提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

本产品为经优化和测试的用于细菌蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物和0.1MEDTA加入裂解液中，即可用于细菌蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解。如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。

本产品可以有效抑制细菌提取物中的各种蛋白酶活性，如丝氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂，其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Bestatin是氨基肽酶可逆抑制剂；E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制剂；Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制剂；EDTA作为螯合剂是金属蛋白酶的可逆抑制剂。

使用方法：

1. 本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。根据需要，0.1M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中(如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA)。
2. 待所需的抑制剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

除了蛋白酶抑制剂混合物(细菌蛋白提取用),，我公司还供应以下相关产品：



名称：真菌总蛋白质微量提取试剂盒
货号：BTN81202
规格：50次
本产品专门用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的各种酵母材料。

产品特点：
1．破壁效率高，能达到80-90%。
2．可以处理各种酵母样品。
3．操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分析。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二	1.5g
玻璃珠，400μm	5g
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(溶液B成分二需-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
准备工作：将溶液B成分二(干粉)全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分(体积根据每次实验的样品数决定)并放-20℃长期保存。

1．将酵母细胞接种到5mL YPD培养基中，30℃摇晃(250rpm/分钟)过夜培养使其OD600达到0.5～2.0。
2．把酵母细胞培养物转到装有2mL预冷溶液A的10-15mL离心管中，混匀。
3．4℃，5000g离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。
4．用30μL溶液B悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL塑料离心管中。
5．100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。
6．加入0.1g的玻璃珠。
7．在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。
8．加入70μl溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。
9．取5-20μl抽提液上样直接进行SDS-PAGE凝胶电泳。