大型质粒大量提取试剂盒(＞10kb质粒)

特别提示：包括大型质粒大量提取试剂盒(＞10kb质粒)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大型质粒大量提取试剂盒(＞10kb质粒)
英文名称：Large Plasmid Extraction Kit(for cell transfection)
产品货号：ALH091
产品规格：20次

本试剂盒适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒制备。常规的离心柱型质粒抽提试剂盒并不适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒DNA的抽提。这主要是因为大型质粒DNA分子量很大，常常会超过100kb而且一般拷贝数低产量低，使用常规的离心柱吸附膜吸附效率和产量很低而且过膜会打断这些大分子量的质粒DNA。本试剂盒采用改进碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂，只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在Eppendorf管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱，不用酚氯*抽提；基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小，即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒，只要碱裂解法能够提取，就可以有效纯化。此外溶液型的试剂可以按照比例放大缩小进行小提/中提/大提，zuì后可选择任意小体积溶解质粒，浓度可高达3μg/μl。

试剂盒组份(20次)：
RNaseA(10mg/ml)-————————1.3ml
溶液P1—————————————130ml
溶液P2—————————————100ml
溶液PⅢ-————————————110ml
杂质清除剂A-——————————3ml
杂质清除剂B-——————————30ml
内毒素清除剂——————————10ml

试剂盒特点：
1.不需要使用有毒的苯*，氯*等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、 方便、从150-200 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.4-1mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90 %。
2.获得的质粒产量高，超螺旋比例高，纯度好，可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
3.内毒素含量极低（<0.1 EU/μg DNA），可直接应用于细胞转染。

注意事项
1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。
2. 提取大质粒时操作动作要轻柔，应该使用剪大了开口的吸头，防止机械剪切对DNA 的损坏。
3. DNA 沉淀液沉淀离心后，可能看不到明显沉淀。如未见沉淀，担心DNA 丢失，可保留上清液，待完成全部操作后电泳鉴定，以确定是否获得终产物（数百微克DNA 离心沉淀在管的侧壁上，可能无法看到明显团块）。
4. 得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1 相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2 条或者多条DNA 条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过95%。
5. 质粒DNA 确切分子大小， 必须酶切线性化后，对比DNA 分子量Marker 才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道确切大小。

储存条件：室温，有效期18个月。

本制品别名：大型质粒提取试剂盒|大型质粒大量制备试剂盒|无内毒素大型质粒提取试剂盒|转染级质粒大量提取试剂盒|细胞转染用大型质粒制备试剂盒|BAC大型质粒提取试剂盒|PAC大型质粒提取试剂盒|P1大型质粒提取试剂盒|Cosmid大型质粒提取试剂盒

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名称：土壤腐殖酸清除剂
货号：BTN70603
规格：250mL
土壤和湖海沉积物中都含有棕黑色或黑色的腐殖酸，它们对PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以有效去除土壤中腐殖酸是提取土壤微生物DNA的重要环节。但是目前市场上没有专门的产品，针对这一情况，百奥莱博开发了本产品，专门用于对提取DNA用的土壤进行预处理，以清除腐殖酸成分。

产品特点：
1. 清除效果好，一次能使腐殖酸的浓度降低50%左右。
2.适合于黄色、红色、黑色和棕黑色等各种质地的土壤和河海沉积物。
3. 操作过程简单快速，一次处理只需要10分钟。
4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用及效果：
按每1克土壤加10mL本产的比例将样品混合，振荡3～5分钟，3000-5000g室温离心5分钟，弃上清，沉淀可直接用于DNA提取。此操作可以多次重复。

图注：比较水和本产品处理泥碳(腐殖酸含量大于60%)样品的效果，C为用水处理后离心得到的结果，1-5是同一土壤样品用本产品洗涤1-5后所得到的上清液。

图注：用我司土壤DNA提取试剂(BTN60701)提取泥碳样品所得到的DNA溶液，1号样品所用土壤预先用水洗涤过三次，2号样品预先用本产品洗涤过三次。

名称：一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒
货号：BTN80101
规格：50次
本试剂盒是整合一管式病毒DNA提取试剂盒和一管式病毒RNA提取试剂盒两产品而得，专门用于从血清(血浆)等液体样品中同时提取病毒DNA(如HBV DNA)和病毒RNA(如HCV RNA和HIV RNA)的产品。本产品灵敏度高，稳定性好，使用简单快捷，尤其适合于整合到临床PCR或RT-PCR 检测试剂盒中。

试剂盒特点：
1. 回收率高，可以达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。可以跟QIAGEN的同类产品媲美。
2. 灵敏度高，通过PCR 检测到病毒DNA的zuì终灵敏度可以达到30 拷贝/mL样品，通过RT-PCR 检测到病毒RNA的zuì终灵敏度可以达到50 拷贝/mL样品。
3.一管式操作，减少了样品污染的可能。
4.一站式套装，除样品外客户不需要准备任何试剂，降低了实验误差。
5. 安全无毒，不需要使用苯*和氯*等有机溶液。
6.处理量大，如果加上病毒离心富集步骤，zuì多可以处理1.5mL液体病毒样品。
7.与PCR、荧光PCR、RT-PCR、荧光RT-PCR等后续反应兼容。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	40ml
溶液C	50ml
溶液D	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，溶液A4℃保存，溶液B和溶液C室温保存，有效期一年。溶液B和溶液C具有挥发性，使用后需要将瓶盖拧紧。

使用方法：
1. 将0.1-0.2mL液体样品转移到1.5mL 旋盖离心管中。如果需要富集样品中的病毒，可以先将1.5mL液体样品转移到1.5mL 旋盖离心管中,然后4℃ 24,000 g离心60分钟，移弃1.3mL上清液后继续操作下一步的操作。
2. 加入0.6mL溶液A，盖上盖子后振荡3-5秒。
 注意:溶液A用前需37℃-65℃水浴融化并充分摇匀后方可使用。
3.室温静置10分钟。
4. 加入0.6mL溶液B，盖上盖子后振荡3-5秒。
5. 15000g室温离心15分钟。强烈建议在离心管管壁上用记号笔做简单标记以区别离心面和向心面。
6.小心移弃上清。注意不要触及管底的DNA和RNA沉淀。
7. 加入1.0mL溶液C，振荡数秒后15000g室温离心5分钟。注意：将离心管放入离心机时一定要离心面向外。
8. 移弃上清，注意不要触及管底的DNA和RNA沉淀。
9. 短暂离心数秒，注意：将离心管放入离心机时一定要离心面向外。
10.小心移弃残留上清(残留的溶液C会影响后续反应)。此时离心面的管壁上将有可见的膜状沉淀。
11. 加入100-200μl溶液D，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀，使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象。不要离心只取上清使用，因为不溶沉淀物中含有DNA和RNA，必须取混合液使用(哪怕很浑浊)。
12. 直接取适量样品用于PCR或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。

使用效果：
DNA病毒：

图注：用本产品和市场上某同类产品分别提取0.2mL HBV 阳性血浆(含1000拷贝/mL HBV)，DNA 溶于200μl溶液D中，取5μl进行荧光PCR(使用MJ Research的CHROMO4荧光PCR 仪)。红和绿线表示本产品，蓝线表示市场上某同类产品。
RNA病毒：

图注：用本产品和市场上某同类产品分别提取0.2mL HBV 阳性血浆(含1000拷贝/mL HBV)，DNA 溶于200μl溶液D中，取5μl进行荧光PCR(使用MJ Research的CHROMO4荧光PCR 仪)。红和绿线表示本产品，蓝线表示市场上某同类产品。
图注：用本产品和市场上进口Q公司同类产品分别提取0.2mL培养的B型流感病毒上清液(含1000 拷贝/mL 病毒)，RNA 溶于200μl溶液D中，取10μl进行荧光PCR(50μl 体系，使用MJ Research的CHROMO4荧光PCR 仪)。红线表示本产品，蓝线表示进口的Q公司同类产品。

疑难解答：
Q：样品中如果同时有RNA和DNA，DNA 会对RNA的RT-PCR 克隆产生干扰吗？
A：不会。病毒一般或者只含RNA，或者只含DNA，如果样品中正好同时含有DNA 病毒和RNA 病毒，但由于两者之间没有同源性，所以DNA 也不会干扰RNA的RT-PCR扩增。这跟组织细胞中提出的核酸样品不一样，因为后者的DNA和RNA是同源的，即任何RNA分子都有与之同源的DNA分子，所以如果同时存在，DNA 也会在RT-PCR时跟引物结合，产生扩增。干扰RT-PCR。