液体、无菌状态,溶于0.01mol/L磷酸盐缓冲液中,PH7.4、含0.14mol/L氯化钠。不含任何添加剂或防腐剂,注意避免交叉污染。建议本品做为固相捕获抗体,与特异的CRP抗体酶(Ms1036-02或Ms1036-03)配对使用。可用于ELISA、CLIA、RIA等科学研究实验。-20℃分装储存,避免反复冻融。提纯实验
1.材料

单克隆抗体制备流程
(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
20mMol/LNaCl
(2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
40mMol/LNaCl
(3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
80mMol/LNaCl
(4)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
(5)饱和
硫酸铵液
(6)DEAE—纤维素柱
2.操作方法
(1)小鼠腹水用冷PBS液稀释4倍后,于1.00×105转离心30min,去沉淀。
(2)在4℃于上清中缓缓滴加饱和硫酸铵液,边加边搅拌,使溶液最终为50%硫酸铵浓度。
(3)此溶液置冰中30min~60min,然后5000r/min离心10min,去上清。
(4)将沉淀溶于Tris-HCl缓冲液(40mMol/LNaCl)中(溶液可能混浊)。
(5)装入
透析袋于Tris-HCl
缓冲液(20mMol/LNaCl)中透析除盐。
(6)离心去沉淀。

单克隆抗体制备流程
(7)溶液稀释(1:100或更高倍稀释)后,于280nm测蛋白含量,估计蛋白质含量1A280unit=0.8mg蛋白质一般每ml腹水中,含有总蛋白约25mg~36mg。
(8)过DEAE—纤维素柱:纤维素柱高40cm,以20mMol/LNaClTris缓冲液平衡。透析
样品以Tris缓冲液等量稀释。
样品进入柱床速度为1ml~2ml/min,以NaCl线形
梯度洗脱。大部分单克隆IgG于40mMol/L和80mMol/LNaCl洗脱,也有极少例外的单克隆抗体于120mMol/L~150mMol/LNaCl洗脱。测OD280nm收集蛋白峰,单克隆IgG保存备用。
杂交瘤产生各种
免疫球蛋白,但主要是IgG和IgM,究竟是哪种为主,则决定于抗原的免疫程序。免疫一次,且3天后就取脾,多为产生IgM的
B淋巴细胞。免疫多次的多为IgG。