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上海博湖
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25
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贴壁/悬浮
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- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 器官来源:
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- 是否是肿瘤细胞:
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- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
- 免疫类型:
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- 物种来源:
人/小鼠/大鼠/其他
- 相关疾病:
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- 组织来源:
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培养条件
HBE, 正常人支气管上皮细胞系DMEM培养基(添加NaHCO3 1.5g/L),90%;优质胎牛血清,10%
气相:空气,95%;二氧化碳,5%
温度:37摄氏度
细胞描述
HBE, 正常人支气管上皮细胞系细胞生长:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
细胞数量:1×106个
细胞传代:1:2传代;2~3天换液1次
细胞特性:HBE细胞来源于人正常的支气管上皮细胞,在原代培养时被转染了人乳头状病毒(HPV)的E6、E7基因而永生化。HBE细胞被广泛用于支气管上皮细胞的生长、分化、形态发生和肺癌的发生与发展的研究。
细胞纯度:93%
细胞活力:87%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
细胞检测:细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
细胞冻存:液氮冻存(基础培养基+10%DMSO+20%FBS)
细胞运输:干冰运输(1 Vial)或活细胞运输(T-25 flasks)
细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗
细胞传代:
HBE, 正常人支气管上皮细胞系1. 显微镜下观察细胞,神经干细胞悬浮成“神经球”生长,通常情况下,每两天换液一次,每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中,将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟,收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶,在超净工作台中轻轻吹打10次,注意不要消化太久,消化的目的是缩小神经球的体积,不要消化能单个神经干细胞,那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基,吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后,去掉上清,用新鲜培养基重悬细胞,按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏:
1. HBE, 正常人支气管上皮细胞系 取出冻存管后,投入37℃水浴中,震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心(1000rpm,5 min)。
4. 弃去上清,再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基,转入培养瓶中培养。
细胞冻存:液氮冻存(冻存液:DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO)。
细胞运输:干冰运输(冻存管)/ 常温运输(T-25培养瓶)
细胞鉴定:神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态,放大倍数为200x,右图为nestin染色后的荧光图片(绿色),放大倍数为200x。
HBE, 正常人支气管上皮细胞系相关产品:
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D-虫荧光素游离酸/(S)-4,5-二氢-2-(6-苯并噻唑-2-基)噻唑-4-/D-荧光素/D-冷光素/D-Luciferin;BR,99%;25毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;2591-17-5;2~8℃
D-虫荧光素钠/(S)-4,5-二氢-2-(6-苯并噻唑-2-基)噻唑-4-钠盐/D-荧光素钠盐/(S)-2-(6--2-苯并噻唑基)-2-噻唑啉-4-羧酸钠/4,5-二氢-2-(6--2-苯并噻唑基)-4-噻唑羧酸钠/D-冷光素钠盐/D-Luciferin sodium salt;高纯,99%;25毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;103404-75-7;保存:-20℃
1-亚硝基-2-萘酚/α-亚硝基-β-萘酚/钴试剂/1-亚硝基萘酚/1,2-萘醌-1-肟/1-Nitroso-2-naphthol;BR,97%,有害品;25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;131-91-9;RT
酸性蓝1/食品蓝3/专利蓝VF/专利蓝VF钠盐/4,4’-双(二乙氨基)三苯脱水-2’’,4’’-二磺酸单钠/酸性湖蓝V/酸性湖蓝VN150/五号专利蓝钠盐/舒泛蓝/专利兰VF/Acid blue 1;IND,50%;25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;129-17-9;RT
专利蓝V/C.I.专利蓝V;酸性蓝3 ;专利兰V;专利蓝V号钙盐;专利蓝五号钙盐;酸性湖蓝Ⅴ;酸性蓝Ⅴ/Patent Blue V ;
HBE, 正常人支气管上皮细胞系对苯二甲醛p-Phthalaldehyde623-27-8含量:≥98.0%
十一醛Undecanal112-44-7含量:≥98.0%
藜芦醛3,4-Dimethoxybenzaldehyde120-14-9含量:≥98.0%
香兰素Vanillin121-33-5含量:≥98.0%
钼酸钠Sodium molybdate dihydrate10102-40-6含量:≥98.0%
HBE, 正常人支气管上皮细胞系悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮,因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换;而是每 2 到 3 天加料一次,直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞,然后继续培养扩增,或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞,将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。
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文献和实验实验材料: 1. 手术切除的含支气管的正常肺组织 2. 胰蛋白酶/EDTA液:0.05%胰蛋白酶,0.5mmol/L EDTA 3. 6孔培养板:用多聚赖氨酸包被 4. 不含Ca2+ 和Mg2+的1×PBS(pH=7.2),添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素,pH7.4 5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊 6. 离心管(15ml、50ml) 实验方法: 1. 将分离的两片肺叶组织用含双抗的1×PBS
实验材料: 1. 一般来自鼻咽癌活检组织或引产胚胎的鼻咽组织; 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2; 3. 培养基:可使用ROMI1640培养液,添加20%胎牛血清、5μg/ml胰岛素、2.7×10-7 mol/L氢化可的松。也可用DMEM培养液; 4. 低血清培养液与无血清培养液:基础培养液均为DMEM/F12(1:1,V/V)混合液。配置时,添加1.2g/L
实验材料:1. 人哺乳期早期或断奶后乳汁。2. 培养液:RPMI1640,15%FBS,10%人血清,50μg/ml霍乱毒素,0.5mg/ml氢化可的松,1mg/ml胰岛素。3. HuS(human serum):血库过期的血清,澳大利亚抗原阴性。5cm Nunc塑料培养皿。4. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素,pH7.4。5. 培养用液:1mg/ml胰岛素(Sigma):用6mmol/L盐
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