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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
1年
- 库存：
大量
- 保存条件：
-20°C
- 供应商：
华因康
- 规格：
250U—5000U
概述
Long Taq DNA Polymerase是华因康TaqDNA Polymerase和一种具有3'→5'校对活性的耐热DNA聚合酶按照特定比例混合而成。该酶与普通的TaqDNA Polymerase相比，它具有保真性高、扩增效率高、高效扩增GC Rich的复杂片段（配合2×HYK GC Buffer，with Mg2+）的优良性能。Long Taq DNA Polymerase扩增产物可用于TA克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化PCR产物，加A后再进行TA克隆。
应用特点
活性单位定义
1单位（U）Long Taq DNA Polymerase活力定义为在72℃条件下，30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，催化掺入10nmol 脱氧核苷酸成为酸不溶性物质所需的酶量。
保存
-20°C低温保存。
抑制和失活
失活：酚/氯仿抽提。
质量控制
纯度检测：经SDS-PAGE检测纯度大于95%。核酸内切酶检测：10U Long Taq DNA Polymerase与500ng λDNA在1×Long Taq buffer中37℃共同孵育16h，0.8%琼脂糖电泳检测，DNA没有出现降解和被切断，表示通过该项检测。
核酸外切酶检测：10U Long Taq DNA Polymerase与200ng 50 bp ssDNA在1×Long Taq buffer中37℃共同孵育16h，15%变性PAGE胶电泳检测，DNA没有出现降解，表示通过该项检测。
大肠杆菌DNA污染检测：
PCR 产物：544 bp
Forward primer：5'-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3'
Reverse primer：5'-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-3'
PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
0.8%琼脂糖电泳检测没有544bp产物出现，表明通过该项检测。
质粒污染检测：
T7 Promoter Primer：5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGA-3'
T7 terminator Primer：5’-TATGCTAGTTATTGCTCAG-3'
PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min.
0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。
支原体污染检测：
PCR产物：717 bp
GPO-1：5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA-3'
MGSO：5’-TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC-3'
PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min.
0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。
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文献和实验Long-Range PCR with a DNA Polymerase Fusion
Proofreading DNA polymerase fusions offer several advantages for long-range PCR, including faster run times and higher fidelity compared with Taq -based enzymes. However, their use so far has been limited to amplification of small
out the E.coli strain carrying the Taq polymerase gene on an LB amp plate and innoculate a 5 ml overnight culture with a single colony.• Innoculate a 1 liter culture of LB-amp with the 5 ml of overnight culture and grow to an A600 of 0.2.Add IPTG to a final
Long-Range Polymerase Chain Reaction
fidelity of the Thermus aquaticus (Taq) DNA polymerase (3 ), the most commonly used thermostable polymerase. It is believed that inadvertent nucleotide misincorporations during the PCR extension steps cause chain terminations (3 ). The Taq polymerase
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