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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 英文名：
T4 DNA Ligase
- 供应商：
鼎国
- 库存：
大量
- 规格：
35000U (350U/μl）
产品规格：35000U (350U/μl）
产品储存：-20℃
产品价格：120.00
产品简介：
该酶催化契合双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。需ATP做辅酶。不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。
活性定义：
20μl反应体系中，在16℃下反应30min时，6μg的λDNA/HindIII的酶切产物，90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位。本酶1U相当于0.008 Weiss Unit。
用途：
- DNA片段和载体DNA的连接
- DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接
在1×T4 DNA Ligase Buffer中，16℃温育3-5h或者过夜。16℃，5-30min也能正常进行连接反应，但反应效率会稍微降低。
热失活：
65℃温育10min即可失活。
注意事项：
10×T4 DNA Ligase Buffer中含有ATP，不宜反复冻融。使用时冰上融化，并小量分装使用。缓冲液在溶解时出现少量沉淀如正常现象。
ATP是反应必须的辅因子。如在反应体系中补加1mM的ATP，连接反应可以在限制性内切酶缓冲液或在T4 多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。
对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用DNA纯化试剂盒（NEP013）或酚氯仿抽提方法等纯化DNA，然后进行电转。
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文献和实验Ligation of DNA with T4 DNA Ligase
recombination and DNA synthesis. DNA ligase from E. coli is a polypeptide with a molecular weight of 74,000 and is NAD-dependent. T4 DNA ligase is the product of gene 30 of the T4 phage, has a molecular weight of 68,000, and is ATP-dependent. Both enzymes
相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
液： 1X T4 DNA Ligase Buffer: [50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, (pH 7.5 @ 25°C)]。推荐DNA浓度(0.1 - 1 µM 的5′末端)。 使用注意：ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。 如在反应体系中补加1 mM的ATP，连接反应还可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4 DNA多聚
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