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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
10mL
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10mL
1. 组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
镍柱介质10mL保存详细介绍：
镍柱介质10mL保存实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
镍柱介质10mL保存操作流程：
1. 根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（如100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中；
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNAwait完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃时仍为液态，有结晶析出，是正常情况）；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本，反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
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文献和实验方式：手动匀浆、机械匀浆 手动匀浆：将样本（含匀浆介质）倒入玻璃匀浆管中，匀浆管下端插入盛有冰水混合物的容器中，将捣杆垂直插入匀浆管，上下转动研磨数十次（6~8分钟），使组织匀浆化。机械匀浆：将已称重的组织装入EP管，加入匀浆介质，用组织匀浆机，在低温条件下，60 Hz，90 s研磨制成组织匀浆。（皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当延长匀浆时间）。 注：组织匀浆后，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否破碎，若没有，可适当延长匀浆时间。生化实验一般不推荐用裂解液进行裂解。 样本保存：组织
今天为大家带来镍柱的保养和清洗建议。 Ni柱的使用与保养 1. 对于一般的预装柱（Crude系列除外），上样前，样品需要使用0.22μm/0.45μm滤膜进行过滤或者离心处理，以避免样品中有细胞碎片等固体物质，堵塞柱子。 2. 如果细胞裂解后非常粘稠，需考虑是否因为DNA、RNA这类核酸物质过多，需要加入核酸酶去除，以降低样品粘稠度，提高上样速度及洗脱效果。 3. 柱子使用过程中，不能超过填料的压力，以免填料被压塌。 4. 每次使用后，可使用5-10倍柱体积的纯水或者结合缓冲
His-tag 时，常遇到的问题是寄主蛋白与填料的非特异性结合，在哺乳动物重组蛋白的纯化过程中，这样的情况更为明显。由于系统中有很多含有组氨酸（histidine）的残基的蛋白，这种蛋白结构与 his-tag 相似，容易与镍柱结合，因此导致目标蛋白纯度降低[13]。FLAG-tag 系统可在非变性条件下进行纯化，能得到高纯度、有活性的蛋白，但其缺点为纯化介质较为不稳定，且纯化成本高上许多[5]。另一常用的标签为 GST-tag，一个 26kDa 的蛋白，其特点是表达量高，具高度抗原性，常用来增加目标
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