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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
54
- 英文名：
250mL
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
250mL
1. 组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
动物 RNAout(TRIzol) 250mL保存详细介绍：
动物 RNAout(TRIzol) 250mL保存实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
动物 RNAout(TRIzol) 250mL保存操作流程：
1. 根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（如100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中；
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNAwait完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃时仍为液态，有结晶析出，是正常情况）；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本，反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
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文献和实验1. 关于 Trizol 的购买： 目前市面上买的大多是 100 ml 装的，比较出名的是 Invitrogen 公司的 Trizol，100 ml 原装的据说要 1200 大洋以上，不过有一种据说香港分装的，只需 600 元，但是相对国产品牌三四百元的价格还是贵了一些。国产很多公司都有类似的 Trizol 试剂，价格大多三百多元，成分都差不多，可以说都是 invitrogen 的山寨产品。比如我用的是北京一家公司的，四百多，做出来也还不错。Takara 有一款专门提取 small
抽提等等）。] 实验所需但试剂未提供的物品： * 酒精 * 0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制） * 75%酒精 8 mM NaOH 如无例外，以下操作均应在15―30℃下完成。 1.DNA 的沉淀 移除中间层上残余的水样层，用酒精从中间层和苯酚层中沉淀DNA 。按最初匀浆化时每1 ml TRIZOL加0.3 ml的无水乙醇，反复颠倒来混合样品。然后将样品置于15―30℃下2―3分钟，再在2―8℃下以不超过2,000×g的离心力离心5分钟沉淀DNA
（颜色变白的哦），并用钳子固定。5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其肺水肿。6. 将 4 度的生理盐水（最好已动物的肝脏发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛(根据所取得材料而定)依次灌入。7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于最大程度的保存目的蛋白和酶的活性。
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