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- 2025年07月16日
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上海机纯实业有限公司
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100T
细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。MTT法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果与细胞死亡的数目未必完全一致。
(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香，可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光， AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔或桔红色荧光。因此，嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光。溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。可透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。
AO/EB双荧光染色试剂盒注意事项：
1、用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechist 33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的碘化( propidium iodide，PI)对细胞进行双染的方法也比较常用。
如有低温离心机进行离心效果更佳。
操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。
EB solution有一定毒性，请小心操作。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验通用，尤其是在进行动态检查时。医琳师妹：我将我所作的方法与大家共享：吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：（1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。将100mg/L溶于PBS的吖啶橙和100mg/L溶于PBS的溴化乙锭各5μl（临用前混合加入，加样量宜小，有时各2μl-5μl足够，量太大容易形成细胞凋亡的假阳性），在照相前混匀
化碳，条件稳定后（5%二氧化碳：5%氧气），将细胞置入培养，分别培养30分钟、1小时、2小时、3小时、6小时、12小时，取出细胞，将细胞吹打成细胞悬液，1000r/min离心30分钟，倾去上清，PBS洗涤一次，离心去上清后，迅速注入3ml 4℃70%的冷乙醇，边注入边振摇，同时反复通过7号针头的注射器抽打5次（或用振匀器振匀），以避免细胞成团，送流式细胞仪PI检测。 10、吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：（细胞
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