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391
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长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
10mg/100mg/1g
特别提示:包括重组胰蛋白酶(溶液)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:重组胰蛋白酶(溶液)
产品规格:10mg/100mg/1g
CAS:9002-07-7
EC:3.4.21.4
来源:重组猪胰蛋白酶,基因工程生产,大肠杆菌表达
1.产品简介
胰蛋白酶是一种丝*酸蛋白酶,可于赖*酸及精*酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,*基酸序列与猪胰蛋白酶一致。重组胰蛋白酶的性质与动物源胰蛋白酶相同。分子量为24kD,最适pH为7.0- 9.0。活性受丝*酸蛋白酶抑制剂如PMSF等的抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。
通常所用的胰蛋白酶为从猪胰腺提取纯化得到。在生物制药过程中,为了确保生物制品的用药安全,动物来源的原材料正在受到越来越严格的规定,比如在胰岛素和疫苗的生产中。重组胰蛋白酶保证了在整个生产过程如发酵、纯化和终产品中无动物源原料使用。生产过程严格遵守NSF ISO9001 2008的规定,按照GMP操作规范生产,确保了产品质量和批次稳定性。产品符合美国药典对于重组胰蛋白酶的规定。
2.产品优势
无动物源性:重组生产,生产过程不使用任何动物源性的原料。
纯度高:生产过程采用自激活方法,无其它任何杂酶污染。
3.产品特性
来源:重组大肠杆菌
性状:无色至淡黄色液体
组分:10mM HCl,20mM CaCl2, pH2.0-3.0。
蛋白浓度:70±10 mg/ml
比活 ≥3800 USP u/mg pro
纯度(RP-HPLC)≥70% β-胰蛋白酶, ≤ 20% α-胰蛋白酶
微生物限量 ≤100CFU/ml
活力单位:25℃,pH7.6,反应体系3.2ml(1cm 光路),每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。
4.产品用途
重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质,可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中,如:重组胰岛素生产;细胞培养、细胞发酵;蛋白质的酶解、测序;各种组织的细胞分离等。
5.推荐使用方法
直接使用,若需稀释,用1mM HCl+5mM CaCl2稀释,避免反复冻融。使用时,酶量:目的蛋白=1:50-1:1000,最适PH为7.0-9.0。
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文献和实验样品:重组胰蛋白酶,比活 4500USP u/mg pro.,上海雅心生物技术有限公司,纯度如图 1 所示。BAEE,Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE(0.25 mM),分别测定 rPT 纯酶液的活性,最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6),25 mM Tris-HCl (pH 7~8),25
4、底物溶液(2.5 mmol/L):精密称取 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)(Sigma)42.8 mg,加入相应 50 ml 体积的测活缓冲液,使其溶解,即为 2.5 mmol/L 的底物母液,现配现用, 使用时,用测活缓冲液 10 倍稀释。 5、供试品:精密称取待测样品适量。平行分装 3 支,置于蓝冰保温运输箱内,室温下放置。 实验方法: 1、重组胰蛋白酶运输条件下的稳定性:样品测定活性,作为初始活性。蓝冰于-20℃ 充分预冷后,取出,与样品同时放入泡沫保温运输
蛋白沉淀出来。经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀。沉淀物经水溶解并调至pH8.0,用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活,同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活,三种酶原相互作用过程如下: 也可采用从胰脏中提取出胰蛋白酶原,利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶,并通过溶液中Ca2+的环境,使胰蛋白酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活,转变为具有活性的胰蛋白酶(胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶
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