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- gelatins
- JC9637
- 进口，国产
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
100ml/500ml
| 规格： | 100ml | 产品价格： | ¥50.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500ml | 产品价格： | ¥180.0 |
自备材料：
酶标仪或分光光度计
96孔板或离心管
操作步骤(仅供参考)：
取1ml蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准(BSA)中，充分溶解后配制成160mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作为溶解BSA稀释液。
将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔，加稀释液补足至20μl。
加适当体积待测蛋白样本到96孔板的样品孔中。如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同，应在待测蛋白样本孔中加入20μl稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋白样本孔中加入20μl稀释液。
各孔加入200μl双缩脲总蛋白试剂, 室温放置10～15min。
测定540nm波长处的吸光值，如无540nm，520～562nm之间的波长也可。
根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
注意事项：
1、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
2、 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置1h或60℃放置15min，颜色会随着时间的延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快。如果浓度较低，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。
3、 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂。
4、 建议每次测定时都做标准曲线。因为颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
5、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的小检测体积。应按比例适当加大双缩脲试剂的用量使总体积不小于小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
6、 检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验蛋白质显色反应之一，即在蛋白质的碱性水溶液中加数滴稀硫酸铜溶液，则显紫蓝～紫红色。除二肽外，肽也会产生同样的反应。由于双缩脲（NH2－CONHCONH2）也显示同样的反应，故以此命名。也可用于蛋白质的定量测定，但灵敏度低。为了克服这缺点，可以和O.Folin的酚试剂反应结合起来使用。
（一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两 个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨
一、原理 蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与二价铜离子作用生成紫红色的络合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质的含量成正比，但双缩脲反应并非蛋白质特有的颜色反应，分子中含二个以上肽键者有此反应。 二、双缩脲 试剂 未失结晶水的硫酸铜（CuSO 4· 5H 2 O）3.0g溶于500ml新鲜制备的 蒸馏 水或刚煮沸冷却的去离子水中，加酒石酸钾钠（NaKC
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