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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
一年
- 保存条件:
天然裂解液储存于 4℃,蛋白酶抑制抑混合物储存于-20℃,其它组分储存于常温
- 规格:
50次
柱式动物组织/细胞总蛋白抽提试剂盒
Column Tissue&Cell Protein Extraction Kit
本产品常温运输( 蛋白酶抑制剂混合液 需冰袋运输);变性裂解液 及 天然裂解液 储存于4℃,蛋白酶抑制剂混合液 储存于-20℃,其它组分储存于常温。保质期12个月。
货号规格
goodPC201plus 50次
goodPC201plus 50次(含蛋白酶抑制剂混合液)
产品内容
| 组分名称 | PC201 | PC201plus |
| 变性裂解液 | 25 mL | 25 mL |
| 天然裂解液 | 25 mL | 25 mL |
| 蛋白酶抑制剂混合液 | 无 | 500 μL |
| 纯化柱 | 50个 | 50个 |
| 收集管 | 50个 | 50个 |
| 塑料研磨棒 | 4根 | 4根 |
产品特点
g
d操作简单快速——最快1 min即可得到变性总蛋白;
g
d无蛋白丢失——可打开DNA双链,高效获取与DNA结合的蛋白;
g
d小样本量、高得率——最小可处理20 μL样本与裂解液混合物,提取的蛋白溶液浓度可达2~8 mg/mL;
g
d适用多种实验——含有两种裂解液,既可用于提取变性蛋白质,也可提取天然蛋白质。
产品简介
good本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法,能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞,有效提取总蛋白。试剂盒同时提供变性和天然两种裂解液,用户可根据下游实验需求进行选择。整个提取过程仅需要1~8 min,由于采用过柱纯化技术,最小可处理20 μL样本与裂解液混合物,最大可达500 μL,提取的蛋白溶液浓度可达2~8 mg/mL,并可有效避免蛋白丢失。所提蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析(货号:ZJ101或ZJ102),但不宜使用 Omni-Rapid™快速蛋白定量试剂盒(货号:ZJ103)。
使用说明
goodA. 提取变性总蛋白
goodgood2a. 贴壁细胞:将预冷的1×PBS(货号:PS110)直接加入培养板、培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞,吸去上清。按照附表(文末)中将相应体积的 变性裂解液 均匀地加入整个器皿表面,用移液器吹打几次;
goodgood2b. 悬浮细胞:低速离心收集细胞,在1.5 mL离心管中加入预冷的1×PBS,涡旋震荡,3,000 rpm离心2~3 min清洗细胞。吸去多余上清,留下与细胞相同体积的PBS,涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的 变性裂解液 ,涡旋震荡裂解细胞;
goodgood注意:①部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果;
goodgood注意:②加入裂解液后,如果细胞裂解物太过粘稠,无法用 200~1,000 µL 吸头吹打,可将细胞裂解物直接倒入纯化柱中,进行后续操作。
goodgood2c. 组织样本:将15~20 mg组织放置于纯化柱上,用塑料研磨棒扭转研磨50~60次,加入200 μL 变性裂解液 ,继续研磨30~60次。如果组织样本起始量较大或者较小,需按比例调整相应裂解液的用量;
goodgood注意:塑料研磨棒可以重复使用,用蒸馏水彻底冲洗干净,用纸巾擦干。
goodgood3a. 贴壁细胞或悬浮细胞:将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中,14,000~16,000 rpm离心30 s取出;
goodgood3b. 组织样本:盖上纯化柱盖子室温孵育1~2 min,14,000~16,000 rpm离心1~2 min取出;
goodgood2a. 贴壁细胞:将预冷的1×PBS(货号:PS110)直接加入培养板,培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞,吸去上清。按照附表中将相应体积的 天然裂解液 均匀地加入整个器皿表面,放置于冰上孵育3~5 min,用移液器吹打几次;
goodgood2b. 悬浮细胞:低速离心收集细胞,在1.5 mL离心管中加入预冷的1×PBS,涡旋震荡,3,000 rpm离心2~3 min清洗细胞。吸去多余上清,留下与细胞相同体积的PBS,涡旋震荡重悬细胞。加入附表中相应体积的 天然裂解液 ,涡旋震荡裂解细胞15 s。将离心管放置于冰上3~5 min,然后涡旋震荡10 s;
goodgood注意:①部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果;
goodgood注意:②加入裂解液后,如果细胞裂解物太过粘稠,无法用200~1,000 µL吸头吹打,可将细胞裂解物直接倒入倒入纯化柱中,进行后续操作。
goodgood2c. 组织样本:将15~20 mg组织放置于纯化柱上,用塑料研磨棒扭转研磨50~60次,加入200 μL 天然裂解液 ,继续研磨30~60次。如果起始量较大或者较小,需调整相应裂解液的用量比例;
goodgood注意:塑料研磨棒可以重复使用,用蒸馏水彻底冲洗干净,用纸巾擦干。
goodgood3a. 贴壁细胞或悬浮细胞:将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中,14,000~16,000 rpm离心30 s取出;
goodgood3b. 组织样本:开盖冰上孵育5 min,盖上纯化柱盖子,4℃,14,000~16,000 rpm离心1~2 min取出;
| 细胞数量(×106) | 裂解液(μL) |
| 0.3 | 20 |
| 0.5 | 50 |
| 1 | 100 |
| 2 | 200 |
| 3 | 500 |
注意事项
good1. 若使用本试剂盒裂解液裂解样本所得产物比较粘稠,此为正常现象;
good2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
good3. 本产品仅限科研使用。
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文献和实验我是用1640养PC12的,细胞状态很好.因为分化后的PC12贴壁很好,等培养液颜色发黄,直接倒掉培养液,在加入就好了,但一般那个时候就可以传代了!丁香园alg的观点: 我的也是PC12细胞,培养条件相同 牛,马血清各5%是唯一不同的 丁香园luop99的观点: 我的经验表明,只加FBS会出现PC12的分化,如alq图样,可能是FBS中含微量NGF,加马血清就不会出现分化,当然要10%浓度。也请教过协和老师
) 肾上腺嗜铬细胞瘤(一种交感神经系统的肿瘤) 形态:多角型细胞 生长特性:贴壁较松,容易成团 注释:PC-12细胞株来源于一种可移植的鼠嗜铬细胞瘤,该细胞对神经生长因子(NGF)有可逆的神经元显形反应,该细胞不合成肾上腺素。 培养液:Ham's F12K (含2 mM L-谷氨酰胺,1.5 g/L NaHCO3)+15%马血清+2.5% 胎牛血清。 传代:吸去培养液。 加入新的培养液,用吸管吹下细胞或用手拍打培养瓶或刮下细胞到培养
Generally, when a new sequence is found, it is important to know if all or parts of it are similar to other known sequences. This can be done by using the new sequence to search for similarity to sequences in a database. The PC/GENE package











