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- 2025年07月15日
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RT
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大量
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
1ml
操作步骤(仅供参考)：
按实验具体要求操作。
加入适量的T4 DNA连接酶、片段化DNA等以及1/10体积的T4 DNA连接酶缓冲液(10×)，37℃ 1h 或4℃过夜。
注意事项：
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
液： 1X T4 DNA Ligase Buffer: [50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, (pH 7.5 @ 25°C)]。推荐DNA浓度(0.1 - 1 µM 的5′末端)。 使用注意：ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。 如在反应体系中补加1 mM的ATP，连接反应还可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4 DNA多聚核苷酸激酶缓冲液
相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
连接实验中的DNA的浓度比酶量定义的状态下低很多10～20倍，所以实际酶量是过量的。平头末端的连接酶的用量要比粘性末端连接所需酶量大10~100倍，因此厂商提供的连接酶浓度往往是高浓度的（宝生物的T4-DNA连接酶浓度350U/ml）。故从这个意义上分析，常规的粘性末端的连接反应体系中酶量的加入往往是过量的。 （3）缓冲体系 不同公司的连接酶缓冲液大部分含有Tris-HCl（pH 7.5）提供连接所需的合适pH值。另外在缓冲液中还有两种主要成份非常重要：DTT和ATP。前者提供一定的还原
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