康宁CoolCell FTS30 程序降温盒，绿色 4320

细胞的冻存与复苏

推荐使用程序降温盒，分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜； 7、 如没有程序降温盒，则按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存，注意转移过程中要保冷，避免产生温差或冻存管融化； 8、 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。   注意事项： 1、 DMSO配制的时候会放热，一定要等冻存液冷却后使用，避免灼伤细胞； 2、 细胞离心后尽量吸干净上清液，减少培养基残留，避免稀释冻存液； 3、 不建议手动梯度降温，温度不稳定，容易

操作篇：western blot 之发光鉴定

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定

来来来，大神教你如何冻存细胞，里面窍门可多啦~

g，5 分钟)。2．去上清液，加入含 20% 以上小牛血清的完全培养基或血清，于 4℃ 预冷 15 分钟后，加入 10% 的 DMSO，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，分装于细胞冻存管，细胞浓度为 3×106～1×107 /ml 之间。3．将上述细胞分装于冻存管中，将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记 (日期、细胞种类及代次、冻存支数)。4．先将冻存管置入置于 4℃ 30 min，再转入- 20℃ 2 h 后，再放入- 80℃ 冰箱冷冻过夜，次日保存到液氮罐中。目前更多使用程序降温盒