免疫沉淀磁珠

Santa Protein A/G免疫沉淀磁珠

PRODUCT
Protein A / G PLUS作为琼脂糖缀合物提供，用于免疫沉淀（IP）。 产品组成：含有0.02％叠氮化物的2.0ml PBS缓冲液中含有0.5ml琼脂糖。 用BSA预先封闭蛋白A / G PLUS-琼脂糖以减少非特异性免疫球蛋白结合。 2mlProtein A / G PLUS可用于100次免疫沉淀反应，每次反应以20μl Protein A / G PLUS重悬浮体积使用。
特点

• 可以进行由Protein A或Protein G识别的所有种类的抗体和IgG亚类的结合
• 以2.0m包装l提供：可进行100次反应
• 建议每次免疫沉淀反应体积：20μl
• 结合能力：每1ml磁珠可结合10mg抗体
• 预处理以减少非特异性免疫球蛋白结合
• 与Sepharose CL-6B相关
• 高亲和一下抗体类型：小鼠IgG 1、IgG 2a、IgG 2b和IgG 3，大鼠IgG 2a和IgG 2c，人IgG 1、IgG 2、IgG 3和IgG 4，兔，山羊，牛，猪，绵羊，犬，猫和马IgG
• 弱至中等结合：大鼠IgG 1、大鼠IgG 2b，人IgM、IgA和IgE
• 预清洗，可直接使用

PROCEDURE
1.孵化细胞（100mm细胞培养板中80-90％面积的单层细胞或培养瓶中约2-5×10⁷悬浮细胞）。
2.将3ml冰冷的RIPA缓冲液加入细胞单层中，并在4℃下孵育10分钟。对于悬浮细胞，在15ml锥形离心管中用RIPA缓冲液洗涤细胞沉淀。
3.通过21号针重复抽吸破坏细胞并转移到15ml锥形离心管中。
4.用另外1ml冰冷的RIPA缓冲液洗涤细胞培养板并与原提取物混合。
5.在4℃下以10,000xg离心10分钟来沉淀细胞碎片。将上清液转移到冰上的新15ml锥形离心管中。通过添加1.0μg适当的对照IgG（正常小鼠，大鼠，兔或山羊IgG，对应于一抗的宿主物种）以及20μl悬浮体积的蛋白A / G PLUS琼脂糖。在4°C孵育30分钟。
8.通过在4℃下以2,500rpm（约1,000xg）离心5分钟沉淀磁珠。将上清液（细胞裂解物）转移到冰上的新15ml锥形离心管中。
9.将1ml上述细胞裂解物或约100-500μg总细胞蛋白质转移至1.5ml微量离心管中。加入1-10μl（即0.2-2μg）一抗（最佳抗体浓度应通过滴定测定）并在4℃下孵育1小时。
10.加入20μl重悬浮体积的蛋白A / G PLUS-琼脂糖。盖上盖子，在摇床平台或旋转装置上于4°C孵育1小时至过夜。
11.通过在4℃以2,500rpm（约1,000xg）离心5分钟收集免疫沉淀物。小心地吸出并丢弃上清液。
12.用1.0ml RIPA缓冲液（更严格）或PBS（不太严格）洗涤沉淀4次，每次重复上述离心步骤。
13.最后一次洗涤后，吸出并弃去上清液，并将沉淀重悬于40μl 1x电泳样品缓冲液中。
14.将样品煮沸2-3分钟并通过SDS-PAGE和放射自显影分析20μl体积样品。未使用的样品可以在-20℃下储存。
15.可选：煮沸后，可以将样品离心以沉淀磁珠，然后对上清液进行SDS-PAGE分析。
产品发表的文献节选：
1. Neary, J.T. and Zhu, Q. 1994. Signaling by ATP receptors in astrocytes.Neuroreport 5: 1617-1620.
2. Ni, M., et al. 1998. PIF3, a phytochrome-interacting factor necessary for normal photoinduced signal transduction, is a novel basic helix-loop-helix protein. Cell 95: 657-667.
3. Carcagno, A.L., et al. 2011. E2F1-mediated upregulation of p19INK4d determines its periodic xpression during cell cycle and regulates cellular proliferation. PLoS ONE 6: e21938.
4. Ching, L.C., et al. 2011. Molecular mechanisms of activation of endothelial nitric oxide synthase mediated by transient receptor potential vanilloid type 1. Cardiovasc. Res. 91: 492-501.
5. Hou, H.H., et al. 2012. N-terminal domain of soluble epoxide hydrolase negatively regulates the VEGF-mediated activation of endothelial nitric oxide synthase. Cardiovasc. Res. 93: 120-129.
6. Romancino DP,, et al. 2013. Identification and characterization of PlAlix, the Alix homologue from the Mediterranean sea urchin Paracentrotus lividus. Dev Growth Differ. 55: 237-46.
7. Lutz D,, et al. 2013. Generation and nuclear translocation of sumoylated transmembrane fragment of cell adhesion molecule L1. J Biol Chem. 287:17161-17175.
8. Cottarel J,, et al. 2013. A noncatalytic function of the ligation complex during nonhomologous end joining. J. Cell Biol. 200: 173-186.
保存：
Store at 4° C, do not freeze; stable for one year from the date of shipment.
仅供科研使用，不可用于诊断
 

IMMUNOPRECIPITATION REAGENTS（IP实验试剂）
产品	特异性	CAT. #	体积	价格
Protein A-Agarose	mouse IgG2a, IgG2b and IgA , rabbit polyclonal Abs, human IgG1, IgG2 and IgG4	sc-2001	2.0 ml	860元
Protein G PLUS-Agarose	mouse IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, human IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4	sc-2002	2.0 ml	1200元
Protein A/G PLUS-Agarose	all of the above Abs	sc-2003	2.0 ml	1200元
Protein L-Agarose	mouse, rat, human IgG, scFv and Fab	sc-2336	2.0 ml	1980元