10×BalbBlot快速转膜液

本快速转膜液使用独特配方，能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF或硝纤膜)上。使用湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)方法，能在15-35分钟内完成转膜过程。

产品特点：
1、快速和环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。
2、兼容性好：快速转膜液能兼容Laemmli胶，预制胶，Bis-Tris胶等多种凝胶。
3、转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。

使用方法：
转膜前的准备：
5-6张裁好的滤纸；裁好的转印膜；足够的1×快速转移buffer

一、湿转法(Tank blot)：
1、按照下表配制1×快速转膜液

	1×快速转膜液配制量
	100ml	500ml	1000ml
10×快速转膜液	10ml	50ml	100ml
无水乙醇	20ml	100ml	200ml
超纯水	70ml	350ml	700ml

2、将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。
3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4、按照以下顺序做好转印三明治结构：
—>负极(阴极)
—>一块海绵
—>2mm滤纸
—>凝胶
—>转印膜
—>1mm滤纸
—>一块海绵(根据三明治的厚度选择是否使用)
—>正极(阳极)

注意：
a.要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
b.PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
c.三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话，可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。
5、将三明治结构放于转移槽中。
注：转移槽中可以不用1×快速转膜液，可以用1×TGS(Tris-Glycine-SDS)电泳缓冲液取代。三明治结构中的快速转膜液足够保证转膜的完成。

二、半干转(Semi-dry blot)：
1、按照下表配制1×快速转膜液：

	1×快速转膜液配制量
	100ml	500ml	1000ml
10×快速转膜液	10ml	50ml	100ml
无水乙醇	20ml	100ml	200ml
超纯水	70ml	350ml	700ml

2、将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。
3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4、按照以下顺序做好转印三明治结构：
—>负极(阴极)
—>下层滤纸
—>凝胶
—>转印膜
—>上层滤纸
—>正极(阳极)

半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。
注意：PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

三、转移条件：
推荐使用恒流转移

电流	转移时间
300 mA	30～35min
330 mA	25～30min
350 mA	25～30min
375 mA	20～25min
400 mA	15～20min

储存条件：18～25℃，有效期1年。