植物核蛋白提取试剂盒

特别提示：包括植物核蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：植物核蛋白提取试剂盒
英文名称：Plant nuclear protein extraction kit
产品货号：HR0103
产品规格：50T/100T

植物核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物核组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(货号HR0389)。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。提取液A长期不用请置-20℃保存。
有效期：一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

产品特点：
1．使用方便。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器
● PBS ● 吸头、离心管 ● 移液器 ●冰盒 ● 匀浆机/器 ●离心机 ● 涡旋振荡器 ●冰箱

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．提取液制备：
每200μl提取液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200-500mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入1-2ml PBS后用匀浆机充分匀浆或者加适量PBS后用Dounce匀浆器充分匀浆。
3．将匀浆用250 目细胞筛过滤；
或者在4℃，100g 力条件下离心1分钟，收集上清，弃沉淀。
4．将滤液在2000g条件下离心5-10分钟，收集沉淀。
5.在沉淀中加入500μl提取液A，充分混匀。
【注】：
●培养细胞1000g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液A重悬。
● 大约每300μl细胞压积中加入1ml 提取液A。
6．将细胞悬液置振荡器上37℃或室温振荡1-3小时。
【注】：
● 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。
● 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至12小时以上过夜处理以提高核蛋白得率。
7.在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
8.在沉淀中加入1ml 提取液B，充分混匀。
9．置振荡器振荡30分钟。
10.在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
11.在沉淀中加入100-200μl冷的提取液C，高速涡旋振荡5秒。
12．置4℃振荡30-40分钟，至无明显沉淀。
【注】：
● 没有持续振荡条件，也可静置，中间每隔几分钟充分混匀。
13.在4℃，16000g条件下离心10分钟。
14．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
15．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，
不必进行超声处理。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

除了植物核蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD)
货号：BTN100908A
规格：30次
本产品是在SDS-聚丙*酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)套装基础上改良而得，主要改良的地方有两处：一是配胶液的pH偏酸，二是将还原剂加入到电泳液中。

产品特点：
1．偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE 更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。
2．能降低蛋白质的脱氨反应和烷基化反应，也能阻止蛋白质的二硫键再生成。
3．把还原剂整合到电泳液中，避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键，蛋白条带比常规SDS-PAGE 更加锐利。
4．可把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个，成分更简单。
5．更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合20 kD以上蛋白，B型适合2-50 kD蛋白)，分离多肽时不需要Tricine-SDS-PAGE。
6．即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
7．安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*酰胺。
8．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

成分	30T(A)	30T(B)
丙*酰胺(干粉)	60g	60g
甲叉双丙*酰胺(干粉)	3g	3g
长效期SDS-PAGE 配胶液，4×	200ml	200ml
长效期SDS-PAGE还原剂	10ml	10ml
TEMED	1.5ml	1.5ml
过硫*铵	1g	1g
长效SDS-PAGE上样液，5×	1ml	1ml
长效期SDS-PAGE电泳液A型	20L	-
长效期SDS-PAGE电泳液B型	-	20L
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存(SDS-PAGE上样液需-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、使用本产品不需要浓缩胶，直接配制分离胶。如果使用A型电泳液(分离30 KD以上蛋白质用)，最好配制10%的PAGE胶；如果使用B型电泳液(分离2-30 KD的蛋白质用)，最好配制12%的PAGE胶。也可以选择其他胶浓度，但各成分用量需要按比例调整。
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙*酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙*酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙*酰胺-甲叉双丙*酰胺(19:1)溶液(简称30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*酰胺。对长效期SDS-PAGE电泳，丙*酰胺与甲叉双丙*酰胺比例一般在19:1，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙*酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*酰胺溶液中，摇晃溶解即得30%的AB溶液，该溶液最好4℃避光(可包上锡箔纸壁光)保存并在一个月内用完。30% AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
3．新鲜配制10%的APS(过硫*铵)：按每0.1克过硫*铵干粉加1mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
4．本产品不需要配制分离胶和浓缩胶两种胶，只需要配一种连续胶。配制方法如下(以下是以配制10mL的胶的用量为例，用户自己需要根据胶的大小决定所需体积)：

胶浓度	用量(mL)			总体积 (mL)
	去离子水	30% AB溶液	4×长效期SDS-PAGE配胶液
10%(对A型)	4.20	3.30	2.50	10
12%(对B型)	3.50	4.00	2.50	10

5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和30μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。
7．在胶的液面达到顶部的时候停止灌胶并插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
8．拔出梳子，用水冲洗加样孔。
9．配制的PAGE胶可以在4℃长期放置数月，直到使用。注意：需要盖上1×长效期SDS-PAGE 配胶液，否则PAGE胶会变干而无法使用。
10．使用时，将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够量的1×长效期SDS-PAGE电泳液(A型或B型)。
 注意：长效期SDS-PAGE电泳液A型或B型均以干粉形式提供，足够配20 L 1×电泳液。配制时需将全部干粉(含多种没有充分混合的成分，必须一次性全部使用)溶解在去离子水中，并定容到1 L，得到20×长效期SDS-PAGE电泳液，使用时再用去离子水稀释成1×电泳液。20×长效期SDS-PAGE电泳液不需要调pH，可以室温放置。
11．在上槽中加入适量的1×长效期SDS-PAGE电泳液和1/200 体积(以电泳液体积为基数)的长效期SDS-PAGE还原剂并用玻璃棒搅拌混合均匀。
12．在蛋白质样品中加入5×长效期SDS-PAGE上样液(8μL样品加2μL上样液)，72℃加热10分钟。注意：上样液中的一些成分在低温保存时会沉淀，所以用前需要65℃保温10分钟左右使沉淀溶解，混匀后才能使用。上样液中的2-巯基*醇容易挥发，使用多次后用户可以在10μl样品(蛋白质样品+上样液的混合液)中补加0.5μl自备的2-巯基*醇原液，以便使蛋白质充分变性。如果样品是蛋白质沉淀(如TCA沉淀得到的蛋白质)，则需要用Tris缓冲液将其pH调到中性(可用pH试纸检测)，否则残留溶剂可能会改变上样液的pH，严重影响电泳效果。
13．短暂离心，取上清液上样。上样的蛋白总量跟检测方法相关，如果用银染，可以只上样ng级别(对每条带的蛋白量而言)，如果用考染，需要上样μg级别(对每条带的蛋白量而言)。
14．用150V恒压电压进行电泳，直到染料进入胶底部(在B型电泳液中，溴酚蓝的速度相当于3-5 KD的蛋白质)。注意：在长效期SDS-PAGE中的电泳速度要快于普通SDS-PAGE。在B型电泳液中的速度又快于A型电泳液。过程中，电流会降低，属于正常现象。
15．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或转膜)。注意：Western转膜需要专门的转膜液(百奥莱博可以提供)。

二、如果需要更高分辨率，也可把上法配制的胶当成分离胶，并在其上再叠加4%的浓缩胶，操作如下：
16．按上面方法配制分离胶，只是倒胶后在胶面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm 厚的水，使胶顶部液面平整。室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)后，用1×长效期SDS-PAGE 配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
17．配制4%浓缩胶(参考上节第4-6 步)。倒胶后在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
18．拔出梳子，用1×电泳液(A型或B型)冲洗加样孔，后续处理接第7步。