N端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白)

特别提示：包括N端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：N端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白)
英文名称：N-YFP plasmid（with CMV promoter）
产品货号：YT478
产品规格：1μg

本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含YFP(Yellow Fluorescent Protein, 黄色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个YFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有YFP标签的融合蛋白。利用YFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用YFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。YFP与GFP高度相似，可以尝试用GFP抗体检测YFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
YFP	677-1393
Multiple cloning site	1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site	1503-1524
SV40 polyA signal	1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication	2057-2363
bla promoter	2388-2512
SV40 promoter	2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2905-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3697-4155
pUC origin	4284-4951

本质粒(5003bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。

除了N端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白),，我公司还供应以下相关产品：



名称：λDNA
货号：BTN90407A
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：平末端载体连接试剂盒（含多克隆位点）(T4连接酶技术)
货号：ALH339
规格：20次|40次
本试剂盒是一种先进的自杀基因阳性选择克隆系统，可以高效克隆平末端PCR产物和任何具有平末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的 DNA片段都有效。 阳性选择载体和插入片段连接仅需5分钟即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu polymerase）扩增的平末端 PCR 产物可直接连入克隆载体。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。

试剂盒提供一个新颖的自杀基因阳性选择克隆载体t。该载体含有致死的自杀基因（内含多克隆位点），当载体与片段连接成功，自杀基因无法正确表达，包含重组子的细胞可以正常生长；当载体与片段连接不成功，载体自连后自杀基因正确表达，包含自连空载体的细胞无法存活，即“零ZERO”背景。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，极大地加速了克隆筛选进程。

为方便酶切作图和插入片段基因操作，本试剂盒克隆载体的多克隆位点两侧各包含一个BglII识别序列。此外，该载体含有T7启动子，可用于体内或体外转录、插入片段测序等研究。

试剂盒组份(20次)：
平末端载体(40ng/μl)——————————————20μl
900bp Control（40ng/μl）————————————5μl
2×Quick Ligation Buffer-————————————100μl
T4 DNA ligase（5U/μl）—————————————20μl
Forward Sequencing Primer (10μM)————————50μl
Reverse Sequencing Primer (10μM)————————50μl
注：
forward sequencing primer, 23-mer 5’-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3’
reverse sequencing primer, 24-mer 5’-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3’

储存条件：-20℃，有效期6个月。

本制品别名：平末端克隆试剂盒