Hoechst33258染色试剂盒

特别提示：包括Hoechst33258染色试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Hoechst33258染色试剂盒
产品货号：HR0459
产品规格：100T

Hoechst33258染色试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33258比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA 结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33258 排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA 结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。本Hoechst 33258染色试剂盒可直接用于活细胞或组织的细胞核染色，也可用于固定细胞或组织的细胞核染色。

储存条件：染液2-8℃避光保存。长期保存-20℃避光保存。试剂B 2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程，因此最好在染色后立即进行分析。
●染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰*酮固定后检测。以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色也可不用多聚甲*固定，其他方法请参阅相关资料。

1．染色工作液的配制：
根据样品数用 PBS将Hoechst染色液20倍-50倍稀释，配制成染色工作液。
2．细胞涂片的制备：
贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲*固定5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。
对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，1000-2000rpm离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1×105/ml，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲*固定5min；
3．用 PBS洗涤涂片两次。
4．加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-20分钟。
5．用 10倍稀释的试剂B 洗涤涂片。
6．用荧光显微镜检测结果。染料-DNA 复合物的最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

结果分析：
Hoechst 33258染色后，置于荧光显微镜下，选用340-350nm的激发光观察：正常细胞的细胞核呈弥散均匀蓝色荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光，颜色有些发白。如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。

除了Hoechst33258染色试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞凋亡与坏死检测试剂盒
货号：YT130
规格：100次
本试剂盒提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡与细胞坏死检测方法。染色快速方便，两种染料的染色仅需20-30分钟，一步染色即可完成。使用方便，使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可以为10-100万。

试剂盒组份：
细胞染色缓冲液———100ml
Hoechst染色液———0.5ml
PI染色液——————0.5ml

本试剂盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)双染的方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。
Hoechst 33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋强蓝色荧光。参考下图，左图为诱导凋亡前的正常细胞，右图为诱导凋亡后的细胞。



注意事项：
1. 需使用流式细胞仪进行红色和蓝色双荧光检测。也可使用荧光显微镜检测。
2. 染色后宜尽快检测。
3. Hoechst 33342对人体有害，碘化丙啶(PI)对人体有刺激性，请注意适当防护。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

名称：Caspase 2荧光法检测试剂盒(AFC)
货号：KFS201
规格：20T|50T|100T
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织Caspase-2 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-2 为关键的执行分子，与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-2 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-2 由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase-2 荧光检测试剂盒就是将Caspase-2 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当底物被Caspase-2 剪切后，发色基团即游离出来，可通过荧光酶标仪测定其荧光强度（激发波长=485nm,发射波长=535nm）。

注意事项
1. Caspase-2 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-2 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-2 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg，以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求，因为Caspase-2 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的RFU 值偏低，可以通过适当延长反应的时间，如果值还是不高，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

名称：JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
货号：SY0489
规格：100 tests
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit）是一种以JC-1 为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，也是用来检测细胞早期凋亡的常用方法。

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针，JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

线粒体膜电势的破坏是细胞凋亡早期发生的一个标志性事件。细胞受到凋亡诱导后线粒体膜电位的变化使得膜的通透性发生改变。膜通透性的增加，使得线粒体蛋白包括细胞色素C、Smac/DIABLO、HtrA2/OMI、核酸内切酶G（EndoG）、凋亡诱导因子（AIF）等从线粒体基质释放到细胞浆。细胞色素C的释放伴随膜电位的完全丧失，进而引发细胞凋亡酶的级联效应。

本试剂盒提供了CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100 个样品；对于12 孔中的样品，本试剂盒共可以检测200 个样品。

试剂盒组份：

组分	规格	保存方法
JC-1(200×)	5× 100 μl/管	-20℃避光
JC-1染色缓冲液（5×）	80 ml	-20℃避光，也可4℃保存
CCCP（50 mM）	20 μl	-20℃避光
超纯水	90 ml	4℃保存

储存条件：20℃避光，尽量避免反复冻融，有效期一年

注意事项

1）JC-1（200×）在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
2）必须先把JC-1（200×）用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后，才可以加入JC-1染色缓冲液（5×）。不可先配制JC-1染色缓冲液（1×）再加入JC-1（200×），这样JC-1会很难充分溶解，会严重影响后续的检测。
3）装载完JC-1后用JC-1染色缓冲液（1×）洗涤时，使JC-1染色缓冲液（1×）保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
4）JC-1探针装载完并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
5）请勿把JC-1染色缓冲液（5×）全部配制成JC-1染色缓冲液（1×），本试剂盒使用过程中需直接使用JC-1染色缓冲液（5×）。
6）如果发现JC-1染色缓冲液（5×）中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
7）CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有毒，请注意小心防护。