Ni琼脂糖凝胶

特别提示：包括Ni琼脂糖凝胶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Ni琼脂糖凝胶
英文名称：Ni-Agarose Resin
产品货号：WE0272
产品规格：10ml

  该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力，能够高效一步纯化带有6个组氨酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点，较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固，有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力，提高纯化效率。较高的基团密度，大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统(如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌)中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子，可直接使用，方便，快捷。

支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径：50-160μM

注意事项：
1、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT或EDTA。
2、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
3、为提高纯化效率，首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最佳使用浓度。可以使用线性或梯度浓度的咪唑(20-500 mM)洗脱蛋白，并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
4、为避免柱子被堵塞，请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.45μM过滤器过滤。建议将裂解液进行离心，或者使用0.45μM过滤器过滤。
5、柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、可溶性蛋白纯化缓冲液配方：

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	氯化钠
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

2、包涵体蛋白纯化缓冲液配方：

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	氯化钠	尿素/盐酸胍
Inclusion Body Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M/6 M
Inclusion Body Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M/6 M

II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护层，将填料和乙醇一起混匀，以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)本实验是通过重力作用使溶液流出，如果溶液不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使其流出。
2、向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。

III 可溶性蛋白的纯化
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml细菌裂解液，超声裂解菌体。10000×g离心10分钟后，收集上清。
2、将上清液过柱，流速为10倍柱体积/小时。
3、使用15倍柱体积的Soluble Binding Buffer冲洗柱子，收集流穿峰。
4、使用5倍柱体积的Soluble Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
5、洗脱后，依次使用3倍柱体积的Soluble Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。

Ⅳ 包涵体蛋白的纯化
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml 细菌裂解液，超声裂解菌体。
2、离心，弃上清，将沉淀重悬于Soluble Binding Buffer 中(如有需要，可进行超声波处理，超声前可加入1-5 mM 磷酸酶抑制剂混合物)。
3、重复操作2，直至包涵体清洗干净(呈较洁净的乳白色状)。
4、将沉淀重悬于Inclusion Body Binding Buffer中，冰浴1小时，使包涵体溶解。
5、10000×g离心20分钟，将上清以孔径为0.45μM的滤膜过滤。
6、将蛋白溶液负载上柱，流速为10倍柱体积/小时。
7、使用15倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer冲洗柱子，收集流穿峰。
8、使用5倍柱体积的Inclusion Body Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
9、洗脱后，依次使用3倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。
注意：在纯化包涵体蛋白时，所有缓冲液均含有变性剂，需要降低Binding Buffer中的咪唑浓度(5 mM或更低)。洗脱时，若蛋白在较高pH下洗脱失败，可以选用低pH缓冲液作为洗脱缓冲液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。

Ⅴ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6M盐酸胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积100%乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%、25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、封柱后2～8℃保存。
8、再次使用前，需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。

储存条件：2～8℃，避免冷冻

除了Ni琼脂糖凝胶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：CHAPS
货号：BTN131043
规格：5g
CHAPS全名是(3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate)，中文名是3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐，多一个羟基就是CHAPSO，全名是3-[(3- 胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-2- 羟基-1- 丙磺酸盐。它们的特点是能够破坏非特异性蛋白相互作用。与非离子型去垢剂相比引起蛋白聚集的几率更小。电中性并且不会引起变性。可以通过透析去除。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：40％丙稀酰胺溶液(29:1)
货号：RFT068
规格：100ml
40%丙稀酰胺(29:1)即为含40% acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和bisacrylamide的质量比例为29:1。常用于配制*烯酰胺凝胶(PAGE胶)，包括SDS-PAGE胶等，可以用于蛋白的分离。

储存条件：4℃，避光。

名称：Western湿转转膜液
货号：RFT080
规格：10×1L
本Western转膜液是一种安全无毒的转膜液，没有使用剧毒的*醇，也没有使用其它的有毒试剂。本Western转膜液配制便捷，无需调节pH值，用于Western时湿法电转膜。本Western转膜液可以回收，回收后可以再使用2-3次。

使用方法：
1、取一袋可以配制1升Western转膜液的粉剂，倒入到一洁净的烧杯中，加入蒸馏水到约700毫升，溶解。
2、再加入200毫升无水乙醇或210毫升95%乙醇，混匀。
3、然后在量筒中用蒸馏水定容到1升。混匀后即可使用。没有用完的转膜液可室温保存，通常两周内使用没有任何问题。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时，应该丢弃。

储存条件：室温，有效期2年。

名称：端粒酶活性荧光实时定量PCR法检测试剂盒(人)
货号：KFS307
规格：50T

名称：斑*素(蛋*磷酸酶2A抑制剂)
货号：SY0332
规格：25mg
斑*素Cantharidin，一种有效蛋*磷酸酶2A（protein phosphatase 2A, PP2A）抑制剂，IC50 =40 nM；Cantharidin也可抑制蛋*磷酸酶1（protein phosphatase 1, PP1），IC50=473 nM。

CAS：56*25-7
分子式：C10H12O4
分子量：196.20
纯度：≥98%
外观：白色至类白色固体
溶解性：溶于DMSO（25mg/ml 加热），*酮（8mg/ml），乙醇（8mg/ml 加热）等。
储存条件：4℃，有效期一年。
结构式：


名称：谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)
货号：SY0396
规格：10ml
本品是一种GST标签蛋白纯化树脂，结构上是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

此外，本品特异性好，性价比高，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。

基质（Matrix）：高度交联的4%琼脂糖微球
配体（Ligand）：通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞10mg GST protein/ml 基质（40kDa）
最大压力（PressureMax）：0.3 MPa, 3bar
pH稳定范围：3-12
储存缓冲液：20%乙醇
储存条件：4℃，有效期2年

名称：封闭正常人血清
货号：QN1189
规格：5ml

名称：封闭用马血清(原液)
货号：QN1245
规格：10mL|100mL
封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。在选择封闭血清时，要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且封闭血清来源不能与一抗来源相同，可用与二抗相同来源的封闭血清。

使用方法：
使用时，用PBS(0.01mol/L pH7.2-7.4)将封闭血清原液稀释10或20倍，配成10%或者5%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。

储存条件：-20℃，有效期5年。

名称：植物核蛋白提取试剂盒(酶法，pull down适用)
货号：HR8046
规格：50T/100T
植物核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。提取过程简单方便。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物核组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒采用优化的试剂配方组成，特别适用于下游进行蛋白质相互作用的研究实验，包括免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)、Pμll-down等实验。
本试剂盒提取的蛋白也可以用于Western Blotting、蛋白质电泳、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的植物核蛋白，回收率提高，纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法较低。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒(相关产品HR0103)，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。提取液A长期不用请置-20℃保存。
【注】：
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
●蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● Dounce匀浆器● 移液器●冰箱●冰盒
试剂：
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s
PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材：
●离心管● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．提取液制备：
每200μl提取液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200-500mg 植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入1-2ml PBS 后用匀浆机充分匀浆或者加适量PBS 后用Dounce 匀浆器充分匀浆。
3．将匀浆液用100μm细胞筛过滤；
【注】：
● 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。
●有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将1ml 吸头尖稍微剪掉一点使用。
4．将滤液在2000g条件下离心5-10分钟，收集沉淀。
5.在沉淀中加入500μl提取液A，充分混匀。
【注】：
●培养细胞1000g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液A重悬。
● 大约每300μl细胞压积中加入1ml 提取液A。
● 一般加入样本体积的2-3倍体积的提取液A，充分淹没样本即可。
6．将细胞悬液置振荡器上37℃或室温振荡12-72小时。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。
● 根据下游蛋白的应用选择合适的温度，最佳温度为55℃。
● 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短4小时即可。
● 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至72小时以上处理以提高核蛋白得率。
7.在2000g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
8.在沉淀中加入提取液B，用Dounce 匀浆器充分匀浆，在匀浆液中补充提取液B 至1ml，充分混匀。
9．置振荡器振荡5-10分钟。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，置4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
10.在2000g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
11.在沉淀中加入100-200μl冷的提取液C，高速涡旋振荡5秒。
12．置4℃振荡20-40分钟。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，置4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
13.在4℃，12000g条件下离心10分钟。
14．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
15．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。