艰难梭菌毒素通用型PCR检测试剂盒(染料法)

特别提示：包括艰难梭菌毒素通用型PCR检测试剂盒(染料法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：艰难梭菌毒素通用型PCR检测试剂盒(染料法)
英文名称：Clostridium difficile PCR Kit
产品货号：BTN11-180502
产品规格：50次

本产品是基于tcdB 毒素基因开发的艰难梭菌毒素PCR试剂盒。艰难梭菌（Clostridium difficile，CD）又称难辨梭状芽孢杆菌，是一种厌氧革兰染色阳性芽孢杆菌，广泛分布于自然环境及动物和人的粪便中，主要通过粪-口途径传播。艰难梭菌是引起医源性腹泻的重要病原菌，与大量抗生素使用有关，其感染典型表现是伪膜性肠炎。艰难梭菌产毒菌株所致的感染为艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection, CDI)，CDI 实验室诊断多基于腹泻粪便中检测其毒素A 或者B。研究发现艰难梭菌产毒菌株大部分同时产生A毒素及B 毒素,也有少部分产毒菌株仅仅产生B 毒素。因此,实验室及临床常常通过检测B 毒素来确诊CDI。

产品特点：
1. 使用即用型PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。客户不需要准备各个成分。
2. 基于tcdB 毒素基因开发，具有很高的特异性。
3. 本产品足够至少50 次PCR 检测（30 μL 体系，含阳性对照和阴性对照）

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
即用型PCR Mix 3.0(含染料)	BTN90805b	1mL
tcdB基因专一性引物	Yw14481449	100uL
tcdB基因阳性对照，10E10copy/μL	Yw14501451	100uL
超纯水	BTN00935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

除了艰难梭菌毒素通用型PCR检测试剂盒(染料法),，我公司还供应以下相关产品：



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货号：SYA021
规格：48次/盒

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货号：SYA023
规格：48次/盒

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货号：SYA024
规格：48次/盒

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货号：SYA027
规格：48次/盒

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货号：SYA047
规格：48次/盒

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规格：48次/盒

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规格：48次/盒

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规格：48次/盒

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规格：48次/盒

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规格：48次/盒

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规格：48次/盒

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货号：SYA094
规格：48次/盒

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货号：SYA096
规格：48次/盒

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货号：SYA102
规格：48次/盒

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货号：SYA104
规格：48次/盒

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货号：SYA111
规格：48次/盒

名称：牛种布鲁氏菌单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA117
规格：48次/盒

名称：恶性疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA123
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对恶性疟原虫特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR 探针技术进行恶性疟原虫的检测。

二、用途：
本试剂盒可用于恶性疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置，还可用于恶性疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)

组份	数量	规格
恶性疟原虫荧光PCR反应液(qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(DNA Polymerase MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
恶性疟原虫阳性对照(PTC)	1管	50μL/管

四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列，Bio-Rad 系列，Roche 系列等荧光定量PCR 检测仪等。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃保存，避免反复冻融，有效期为6个月。

六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液：用一次性无菌5ml 注射器抽取疑似人或动物血3-5ml，置于枸橼酸钠或EDTA2Na 抗凝管中，摇匀送检。
肺脏等组织：取上述组织1g左右，置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本：取相应标本3-5ml，转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本：直接取200μl 抗凝血，转至一洁净的1.5ml 离心管中，加入1ml 双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm 离心5min，弃上清，至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13000rpm 离心5min，弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织：剪取约0.1g 组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本：取标本2-3mL，13000rpm 离心3min，弃上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl进行PCR 反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(恶性疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14μL	N×14μL
酶混合液	1μL	N×1μL
总量	15μL	N×15μL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明恶性疟原虫核酸阴性。
如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行恶性疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。