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文献和实验Western Blotting 膜法学堂:选择正确的转印膜,优化
。PVDF膜不易撕裂,有更长的保质期,不会像纯硝酸纤维素膜那样放久了会裂或卷曲,而且更容易做抗体洗脱和二次抗体结合。使用PVDF膜的另一个优势是,PVDF膜能兼容更多的下游实验:如使用考马斯蓝染色配合的条带切割和氨基端测序、蛋白质水解/肽段分离/内部测序以及免疫检测等应用 (Kurien, et al., 2003)。 硝酸纤维素膜典型的蛋白结合量是80-100 μg/cm2,而PVDF膜的结合量是100–300 μg/cm2,更高的蛋白结合量能帮助免疫
Two dimensional peptide mapping
Count samples 9. Resuspend the sample in 10 microliters H2O for an 8.9 map (or appropriate electrophoresis buffer if you're using another buffer for electrophoresis ). Load 1 to 2.5¨microliters on the 0.1 mm thick, 20 cm x 20 cm cellulose
Semi-dry Transfer Apparatus Biorad, Cat# 170-3940, or equivalent Power Supply 0 - 100 VDC (adj. current to 1 Amp) Immobilon-Ptransfer membrane 0.45 µm pore size; cut to same size as gel (Millipore, Cat# IPVH304-FO, or equivalent) Filter Paper
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