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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
477
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
100ml
特别提示:包括Triton-SDS细胞裂解液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Triton-SDS细胞裂解液
产品货号:GL1474
产品规格:100ml
用途:
裂解缓冲液
注意事项:
主要由2%Triton X-100、氯化钠、Tris-HCl、SDS组成,。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储存条件:-20℃,12个月
除了Triton-SDS细胞裂解液,,我公司还供应以下相关产品:
名称:Western及IP细胞裂解液
货号:YT038
规格:100ml
本品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris(pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036,YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储存条件:-20℃,有效期一年。
名称:枸橼酸缓冲液
货号:SNM489
规格:500ml
名称:4%多聚*醛(不含DEPC)
货号:SNM499
规格:500ml
名称:蛋白Marker(36KD)
货号:RFT040
规格:10mg
本产品包含一种已知分子量的标准蛋白质,分子量大小为36kD,可以用来判断 SDS-PAGE未知蛋白的分子量。本Marker以干粉状态提供。
使用方法:
1、配制10mg/ml 36kD蛋白Marker母液:取10mg 粉末溶于1ml超纯水中。此溶液-20℃贮存。
2、按照下表配制Marker溶液
| 配制量 | 浓度 | 36KD母液(10mg/ml) | 超纯水 | 5×DualColor蛋白上样缓冲液 |
| 10μl | 0.2 μg/μl | 0.2μl | 7.8μl | 2μl |
| 50μl | 0.2 μg/μl | 1μl | 39μl | 10μl |
| 100μl | 0.2 μg/μl | 2μl | 78μl | 20μl |
3、取配制好的溶液彻底混匀后,95℃处理5分钟立即上样电泳,每次上样10μl。
4、电泳结束后,染色,观察结果。
储存条件:-20℃。
名称:5×非还原蛋白上样缓冲液
货号:SY0358
规格:2ml
5×非还原蛋白上样缓冲液,是一种经过改良的以溴酚蓝为染料,5倍浓缩的蛋白上样缓冲液,可用于常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。本品不含还原剂。
本品含有SDS,SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS还可以断开分子内和分子间的氢键
,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)5×非还原蛋白上样缓冲液必须完全溶解后再使用。
操作方法
1)在室温或不超过37℃的水浴中溶解5×非还原蛋白上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。
2)按照每4 μl蛋白样品加入1 μl 5×非还原蛋白上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和5×非还原蛋白上样缓冲液。
3)100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。
4)冷却到室温后,直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
5)通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验降解测序。 五、注意事项 细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP40 或 Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2% SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂,如商品化的 cocktailer。 使用明确的抗体,可以将几种抗体共同使用。 使用对照抗体: ① 单克隆抗体:正常小鼠的 IgG 或另一类单抗 ② 兔多克隆抗体:正常兔
原理 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是利用抗原和抗体的特异性结合以及 Protein A 或 G 特异性地结合到抗体的Fc 片段的现象探测两个蛋白分子间是否存在相互作用的一种方法。在细胞裂解液中加入针对蛋白M的抗体,孵育后再加入Protein A 或 G 预处理的 Sepharose 珠,若细胞中有与蛋白M结合的蛋白 N,就可以形成这样一种复合物:“蛋白 N-蛋白M—抗蛋白 M 抗体—Protein A 或 G—Sepharose 珠”,经 SDS
,约每克湿菌加3 mlTE 缓冲液。② 按超声处理仪厂家提供的功能参数进行破菌;10 000g 离心,15min ,分别收集上清液和沉淀。③ 分别取少量上清和沉淀,加入等体积的2× 凝胶电泳加样缓冲液,进行SDS -PAGE 。注意事项:超声破碎与声频、声能、处理时间、细胞浓度、菌种类型等因素有关,应根据具体情况掌握;超声波破菌前,标本经3 -4 次冻溶后更容易破碎。2 )包涵体的分离蛋白质在细菌中的高水平表达,常形成相差显微镜下可见到的细胞质颗粒,即为包涵体,经离心沉淀后可用Triton
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