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Bradford Protein Assay Kit
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上海烜雅生物科技有限公司
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20
Bradford 蛋白浓度测定试剂盒产品介绍：
bradford蛋白定量试剂盒产品内容：
产品简介：
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一．微孔酶标仪法 1. 完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。 4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。 6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 二．分光光度计法 如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下： 1. 取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。 3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml 5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4. 按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来清洗比色皿)
5. 反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表：
此图为伯乐酶标仪680，单波长，570nm测得。室温反应三分钟
Bradford 蛋白浓度测定试剂盒相关产品：
| 组成 | 包装（2500微孔) | 保存 |
| 5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
| PBS稀释液 | 30ml | 2-8℃ |
| 蛋白标准(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
产品简介：
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一．微孔酶标仪法 1. 完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。 4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。 6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 二．分光光度计法 如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下： 1. 取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。 3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml 5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4. 按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来清洗比色皿)
| 离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（样品管1） | 8（样品管2） | 9（样品管3） |
| 标准蛋白BSA | 0ul | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul适当稀释的样品1 | 500ul适当稀释的样品2 | …… |
| PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0ul | 0ul | 0ul | 0ul |
| 1XG250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
| 离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
| 加染色液（分钟） | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
| 测OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |
此图为伯乐酶标仪680，单波长，570nm测得。室温反应三分钟
Bradford 蛋白浓度测定试剂盒相关产品：
| 羊抗人IgG血清IgG | 冻干品或溶液 |
| 羊抗人IgA血清IgG | 冻干品或溶液 |
| 羊抗人IgM血清IgG | 冻干品或溶液 |
| 驴抗羊IgG血清IgG | 冻干品或溶液 |
| 驴抗兔IgG血清IgG | 冻干品或溶液 |
| 驴抗豚鼠IgG血清IgG | 冻干品或溶液 |
| 羊抗豚鼠IgG血清IgG | 冻干品或溶液 |
| 驴抗小鼠IgG血清IgG | 冻干品或溶液 |
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| 羊抗人IgG血清 | 冻干品或溶液 |
| 羊抗人IgA血清 | 冻干品或溶液 |
| 羊抗人IgM血清 | 冻干品或溶液 |
| 驴抗绵羊IgG血清 | 冻干品或溶液 |
| 驴抗兔IgG血清 | 冻干品或溶液 |
| 驴抗豚鼠IgG血清 | 冻干品或溶液 |
| 兔抗豚鼠IgG血清 | 冻干品或溶液 |
| 驴抗小鼠IgG血清 | 冻干品或溶液 |
| 兔抗小鼠IgG血清 | 冻干品或溶液 |
| Anti-Bdkrb2/B2R(Bradykinin receptor beta 2) | 精氨酸加压素受体2抗体 |
| Anti-Axin1(Axis inhibition protein 1) | 缓激肽B2受体抗体 |
| Anei-ATX/Autotaxin/E-NPP2(Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2) | 轴蛋白1Axin protein 1抗体 |
| Anti-Aurora B | 自分泌运动因子抗体 |
| Anti-B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) | 极光激酶B抗体 |
| Anti-B7-DC/PDL2/CD273(programmed death ligand 2) | 程序性死亡配体1抗体 |
| Anti-B7H4 ( V-set domain containing T cell activation inhibitor 1 ) | 程序性死亡配体2抗体 |
| Anti-BACE/ASP2 | B7H4抗体 |
| Anti-Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) | β分泌酶抗体 |
| Anti-Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) | 相关死亡促进因子Bad抗体 |
| Anti-phospho-BAD(pSer128) | 相关死亡促进因子Bad抗体 |
| Anti-Bak（BCL2 homologous antagonist/killer） | 磷酸化相关死亡促进因子抗体 |
| Anti-BADH2 (Betaine-aldehyde dehydrogenase ) | Bcl-2同源拮抗剂Bak抗体 |
| Anti-Bassoon/BSN(zinc finger protein 231) | BADH2抗体 |
| Anti-Batroxobin | 锌指蛋白231抗体 |
| Anti-Bax （Bcl-2 Assaciated X protein） | 蛇毒巴曲酶抗体 |
| Anti-Bax（Bcl-2 Assaciated X protein） | Bax（小鼠来源抗体） |
| Anti-Bcl-2(B cell lymphoma/leukemia-2) | Bax抗体 |
| Anti-Bcl-xL | Bcl-2抗体 |
| Anti-BBC3/PUMA(bcl-2 binding component 3) | Bcl-xL蛋白抗体 |
| Anti-phospho-Bcl-xL(pSer62) | p53正向细胞凋亡调控因子抗体 |
| Anti-BCHE(butyrylcholinesterase)NT | 抗磷酸化Bcl-xL(pSer62)蛋白抗体 |
| Anti-BCHE(mouse Anti-butyrylcholinesterase Monoclonal) | 丁酰胆碱脂酶抗体(N端) |
| Anti-BCHE(butyrylcholinesterase)CT | 抗丁酰胆碱脂酶单克隆抗体 |
| Anti-BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) | 丁酰胆碱脂酶抗体(C端) |
| Anti-BECN1(Beclin 1) | 脑源神经营养因子/脑衍化神经营养因子 |
| Anti-Beta-casein(β-casein) | 一种抑癌基因抗体 |
| Anti-BAFF/CD257(B cell activating factor) | β-酪蛋白(抗体)兔抗山羊、绵羊 |
| Anti-BFGF/FGF-2 | TNF家族B细胞激活因子抗体 |
| Anti-BGP(Osteocalcin/Bone Gla-protein) | 碱性成纤维细胞生长因子抗体 |
| Anti-Bid (BH3 interacting domain death agonist) | 骨保护蛋白/骨钙素抗体 |
| Anti-BIN1(Bridging integrator protein-1) | BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体 |
| Anti-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death) | 桥连整合因子蛋白抗体 |
| Anti-BIYT5/Survivin variant | 细胞死亡调解子抗体 |
| Anti-BK channel (stretch-activated Kca channel) | 细胞凋亡抑制因子5抗体 |
| Anti-BKCa channels（calcium-activated potassium channel） | BK通道蛋白抗体 |
| Anti-BMP2 (bone morphogenetic protein 2) | 钙激活钾通道蛋白抗体 |
| Anti-BMP4（bone morphogenetic protein 4） | 骨形态发生蛋白-2抗体 |
| Anti-BMP-7(bone morphogenetic protein-7) | 骨形态发生蛋白4抗体 |
| Anti-BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) | 骨形态发生蛋白-7抗体 |
| Anti-BNP （Brain Natriuretic Peptide ） | 骨成型蛋白受体1A抗体 |
| Anti-BOb-1(B-cell oct-binding protein 1) | 脑钠素/利钠肽抗体 |
| Anti-B Raf | B细胞特异性转录因子抗体 |
| Anti-BYTA1（Breast cancer susceptbility gene 1）(human) | B Raf抗体 |
| Anti-BYTA1（Breast cancer susceptbility gene 1）（mouse rat） | 乳腺癌易感基因1抗体(人) |
| Anti-BYTA2（Breast cancer susceptbility gene 2） | 乳腺癌易感基因1抗体（小鼠 大鼠） |
| Anti-BrdU (Bromodeoxyuridine) | 乳腺癌易感基因2抗体 |
| Anti-BrdU (Bromodeoxyuridine) | 溴脱氧尿苷抗体 |
| Anti-BrdU (Bromodeoxyuridine) | 溴脱氧尿苷单克隆抗体 |
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文献和实验相关实验
发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
80.00 预染低范围蛋白质分子量标准（30-80KD） 20次 1 320.00 Bradford蛋白浓度测定试剂盒 200次 1 98.00 一抗兔抗人VEGF 0.1ml 1 110.00 一抗兔抗人COX-2 0.1ml 1 420.00 二抗羊抗兔IgG-HRP 0.1ml 1 130.00 200ul黄吸头 1000支/包 1 100.00 1000ul蓝吸头 1000支/包 1 110.00 0.5-1.0ul白吸头
的标准蛋白作标准品。如果只需要相对蛋白浓度，那么任何一种纯化蛋白均可作为对照标准品。 Bio–Rad 提供两种蛋白标准品，小牛gamma−球蛋白和牛血清白蛋白(BSA)标准品。当你用Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度时，那么标准品的选择就要慎重一些。如果你的样品中主要含有白蛋白，那么BSA将是一个好选择。如果你的样品包含了多种蛋白，gamma-球蛋白可能更合适。而DC和RC DC蛋白测定就几乎不受到标准品的影响，你爱选哪个选
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Bradford 蛋白浓度测定试剂盒
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