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- 上海烜雅
- XY-MY-0076
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- 2025年10月19日
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DAB（3,3′-diaminobenzidine）
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上海烜雅生物科技有限公司
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描述：
3，3’-Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB),FW360.1，是过氧化物酶最重要的显色剂之一。在H2O2 存在的条件下，显色呈鲜艳的棕黄色，可用于免疫组化及各种印迹检查法。
使用说明：
1．在过氧化物酶的检测完成以后，0.01 M PBS 或TBS 充分洗涤，一般5 分钟×4 次。
2．准备100ml 0.01M PBS 或TBS 缓冲液（pH7.2-7.6）。秤取25-50mg DAB 干粉，加入缓冲液中并溶解。使用前吸取30%H2O2 100μl，加入缓冲液中，混匀。将标本浸入显色液中，一般显色１０－３０分钟。若无背景出现则可继续显色。
3．蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时苏木素复染１分钟左右，水洗。
4．脱水，透明，中性树胶封片，显微镜观察。
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文献和实验化物酶，然后用PBS洗涤三次，每次 5min。4 ） 加入一抗（用3%BSA-PBS封闭液1:50稀释一抗），37℃湿盒孵育1h。5 ） 加入Post-blocking室温湿盒孵育30min,然后用PBS洗涤三次，每次5min。6 ） 加入稀释好的辣根过氧化物酶（HRP）标二抗，室温下湿盒孵育30min。7 ） 用PBS洗涤玻片5次，每次5min。8 ） 按照DAB试剂盒说明添加显色液，避光显色30s-5min。用蒸馏水终止显色反应。9 ） 苏木精进行复染色3min,用蒸馏水冲洗。10
（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗； （2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间； （3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间； （4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现
过氧化物酶 DAB 法 过氧化物酶(peroxidase)与细胞 色素氧化酶具有相似的化学本质，是一类氧化还原酶，可使过氧化氢(H2 O2 )分解生成水和释放氧。过氧化物酶广泛分布于乳腺、甲状腺、唾液腺、肠上皮、血细胞和肥大细胞等。存在于细胞过氧化物酶体中，是机体的抗氧化酶，在防止氧代谢物损伤中具有重要作用。显示过氧化物酶常用联苯胺法。联苯胺如DAB和四甲基联苯胺(3，3，5，5，―tetramethyl benzidine,TMB)能被过氧化物酶分解过氧化氢产生的氧所氧
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