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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
pUPRT-DHFR-D虫类基因质粒
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验可更好地表达外源蛋白，外源基因在CHO细胞中扩增是提高表达水平的重要策略之一。 DHFR基因扩增系统 DHFR基因扩增系统最常用，当携带DHFR基因的表达质粒转染CHO细胞后，或携带DHFR基因的标志质粒与携带外源基因的表达质粒共转染CHO-DHFR-细胞后，可以得到在选择培养基生长的细胞克隆，DHFR可被叶酸类似物氨甲喋呤（Amethopterin，MTX）所抑制，不断提高MTX浓度，绝大多数细胞死亡，但在极少数幸存下来的抗性细胞中，DHFR基因均得以扩增。进行性选择抗氨甲喋呤的细胞
Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆
[ 1，2 ] ( 在 Qiagen 的质粒 pEQ-32 的基础上构建而成，F [ 1，2 ] 代表 DHFR 片段 1 )。 ( 2 ) 质粒 pREP4 ( 携带 lac 抑制基因和卡那霉素抗性筛选标记。含有利用质粒 PQE-32 表达的蛋白质的细胞，正如本实验所用的，必须带有此质粒以控制 PQE-32 质粒上 lac 启动子的泄漏表达）（Qiagen 产品）。 ( 3 ) 连接：T4 DNA 连接酶（Fermentas) 和 ATP ( Pharmacia)。 ( 4 ) SS320 电转感受
-K1或者CHO/DHFR-更加适合，那么转染CHO-K1是不是可以直接转染？而转染CHO-DHFR-需要和携带DHFR-的标记质粒共转染？参考见解：做稳定表达是需要把目的基因克隆到一定的载体上的，这个载体同时可以过表达一个抗性基因，如果载体整和到基因组上，这个抗性已经能够克服筛选压力，而这个时候你的目的蛋白也得到了有效的表达。（1）野生型CHO就是ＣＨＯ－Ｋ１（2）CHO－DHFR-是指ＤＨＦＲ缺陷型细胞，ＤＨＦＲ作为筛选标记．（3）你用pcＤＮＡ3.1的话,可以直接转染CHO-K1,加G418筛选即可
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