C75人Dukes'D期的中度分化的人结直肠腺癌

 同义词：C75


背景：C75人Dukes'D期的中度分化的人结直肠腺癌C75细胞系是从一位56岁男性患者中建立的，该患者患有乙状结肠的中分化腺癌，分类为Dukes'D期

物种：人类（智人）

组织：结肠

疾病：人类大肠腺癌，中高分化，Dukes'D期

性别：男，56岁

形态：上皮

生长方式：贴壁

倍增时间：不适用

DNA图谱：釉原蛋白：X，Y

CSF1PO:12个

D13S317:

D16S539

D5S818:

D7S820:9,11

结果1:8,9.3

TPOX:10个


培养基：IMDM+10%FBS

我们强烈建议购买完整的培养基。

冻存介质：90%FBS+10%DMSO

核型：无

继代培养常规：将亚汇合培养物（70-80%）按1:3至1:6进行分离，即使用0.05%胰蛋白酶或胰蛋白酶/EDTA；5%CO2；37°C，以2-4x1000个细胞/cm²接种。

C75细胞生长非常缓慢（见生长曲线）；复苏或继代培养后，细胞至少需要48小时才能重新附着。在此期间，细胞应保持无干扰，以促进粘附。复苏时将细胞离心（100g×5min）以去除二甲基亚砜可促进活细胞培养的建立。一旦附着，细胞在离散岛上生长，使用胰蛋白酶或胰蛋白酶/EDTA对细胞进行继代培养（即使不敲烧瓶）也会产生大团块。可通过反复移液细胞来实现进一步的解聚。
细胞收到后处理：
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
细胞培养步骤：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）