T4 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V）

特别提示：包括T4 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V）
英文名称：T4 (two) - - (V) - enzyme (T4)
产品货号：SV1116
产品规格：10KU|2KU

特性:
DNA 损伤研究
单细胞凝胶电泳（彗星实验）
概述:
T4 PDG（T4 嘧啶二聚体糖基化酶）既有 DNA 糖基化酶活性，又有 AP 裂解酶活性。16 KD 的蛋白质可识别因紫外线照射引起的 cis-syn 型环*烷嘧啶二聚体。该酶切割嘧啶二聚体的 5´ 端糖苷键，同时其内切酶活性切割 AP 位点上的磷酸二酯键。
来源:
含有编码 T4 denV 基因质粒的 E. coli 菌株。
反应条件:
1X T4 PDG 反应缓冲液
[25 mM Na2PO4（pH 7.2 @ 25℃），100 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT]。加入 100 μg/ml BSA，37℃ 温育。
质保声明:
T4 嘧啶二聚体糖基化酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们咨询。
单位定义:
1 单位指 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟内使超过95% 的 0.5 μg 经紫外线照射诱变的超螺旋 pUC19 DNA 变成切刻型质粒的酶量。切刻可通过琼脂糖凝胶电泳来检测。诱变后的质粒 DNA 平均含有 3-5 个嘧啶二聚体。单位活性检测条件请联系我们咨询。
浓度:
10,000 units/ml。
注意事项:
为取得最佳使用效果，建议温育时间不超过 30 分钟。

除了T4 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V）,，我公司还供应以下相关产品：



名称：Klenow片段(3′→5′exo-)
货号：BTN131235
规格：200U
Klenow片段是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解产物。它保留了DNA聚合酶活性，具有3′→5′外切酶活性，但不具有5′→3′外切核酸酶活性。可以在DNA模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物dNTP沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。本产品是重组表达得到。

产品用途：
1．双链DNA 5′突出末端的平滑化。
2．用随机引物制备探针。
3．随机引物标记法。
4．寡核苷酸定向诱变中双链DNA的合成。
5．双脱氧法DNA序列测定(Sanger法)。

产品组成：

成分	规格
Klenow片段(5U/μL)	20μl
10×Klenow Fragment Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以合成的Poly d(A-T)DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10nmol的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

使用举例：(随机引物的同位素标记反应)
1．在微量离心管中配制下列反应液

成份	用量
模板DNA	25ng
随机引物(6-9mer)(1nmol/μl)	2μL
补超纯水到	14μL

2．95℃保温3分钟。然后冰中急冷5分钟。
3．加入2.5μl 10×Klenow Fragment Buffer。
4．加入2.5μl dNTP(0.2mM dATP,dGTP,dTTP)。
5．加入5μl 111TBq/mmol[α-32P].dCTP(3000 Ci/mmol)(1.85 MBq，50μCi)
6．加入1μl本产品，反应液共25μl。
7．37℃反应3小时。
8．65℃加热5分钟。
 反应液可直接作为探针使用。如有必要，可以通过用我司柱式探针纯化试剂盒除去未反应的标记的dCTP。

注意事项：
1．本酶有高度稳定性，稀释时不失活，但剧烈搅拌会失活。
2．由于不含有 5′→3′的外切核酸酶活性，因此没有切口平移活性。
3．可用于双链DNA末端以及缺口的修复。
4．与T4 DNA Polymerase相比，对模板高级结构的抵抗性能较好。
5．由于对DNA的亲和性较强，过量使用易发生凝集作用从而抑制反应进行。
6．若用于5′突出末端的修饰时，补平后有时会多加一个碱基。
7．与DNA Polymerase I相同，ddNTPs的掺入不受底物抑制。