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低温
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臻诺生物
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2 g
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文献和实验CHAPS Insoluble Floating Fraction Preparation
7.5, 50 mM NaCl, 2 mM EDTA). They were finally resuspended in TEBP (TEB plus various protease inhibitors: 1x PIC I and 1x PIC II) to 2 x 108 /ml. CHAPS powder was added at 20 mg/ml. After gentle mixing, the lysed cells were kept on ice for 3-5
进行实验,则磷酸化 c-Src 丢失[4] 。就是说使用溶液法提取的蛋白谱是不完整的,蛋白有非等比例的丢失,内参也有可能存在丢失情况,那么如果做磷酸化蛋白定量,就会出现数据偏差。β整联蛋白是一种磷酸化蛋白,使用 Chaps 进行原代鸡胚成纤维细胞蛋白质提取,Chaps 不可溶组分使用 RIPA 裂解液再次提取,RIPA 不可溶组分再使用 sample buffer 提取,在五次采样(见下图)中,在 Chaps 不可溶组分和 RIPA 不可溶组分中都发现了大量的整联蛋白[5] 。caveolin
除>95%的蛋白提取和样品制备过程中所使用的去垢剂,而蛋白和多肽损失极少。此树脂适用于常用去垢剂的去除,如浓度在0.5-1%的SDS、Triton X-100、NP-40和CHAPS。目前有预装的离心柱和离心板形式,最多可处理100 µL样品。另外,您也可以购买HiPPR Detergent Removal Spin Column Kit,其中包含树脂浆和空的离心柱,便于您自己调整样品体积。 整个处理过程相当简单,仅需15分钟。首先是离心去除保存液,之后用缓冲液平衡树脂并离心,重复
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