Western转膜液（干粉）

【求助】western 转膜 mark转不上

没有SDS? zhanghai123 还有1g SDS aileen83 我做western的转膜缓冲液：Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml 不知道是否能对你有用 haodanzhang 配制转膜液时，甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS，因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是：300mA, 2h,效果

WB 前传：你了解你的目的蛋白吗？

刚开始做 Western blot 的同学们想必都大多都是研究生，虽然科研经历还不是特别丰富，但情感经历一定都比较丰富吧。同学们想想自己刚谈恋爱的时候，你刚喜欢一个人却还没表白之前，是不是每天都要想尽一切办法了解他 / 她的爱好，他 / 她的习惯，他 / 她每天的路线等等，等你心里有数之后再开始考虑如何表白？做实验也一样，在开始 Western 之前，尽可能多的了解你的目的蛋白，这和谈恋爱一样，这样表白成功的概率才会大大增加。当然，表白失败也很正常，我们之前做的功课只是增加成功的概率而已，并不

Western-blot实验操作手册

。也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色，以观察蛋白的残留情况。 4. 封闭(Blocking)： 转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。吸尽洗涤液，加入Western封闭液，在摇床上缓慢摇动,室温封闭60分钟。 从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。 对于一些背景较高的抗体，可以4℃封闭过夜。 5. 一抗