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- 昆明白MEF
- 2026年02月12日
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培养条件：
完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。
培养条件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%
传代方法：
收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代；2~3天1次。
。
注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造
成生长不好。
冻存方法： 冻存液：基础培养基+5%DMSO+20%FBS
储存：液氮储存
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文献和实验基成分：89% DMEM (Gibco # 12100-046)10% FBS (Gibco # 16000-044)1% NEAA (Gibco # 11140-050)MEF每传一代就会生长得更慢些。你第一次传代的比例可以是1:5，但是最后一次的传代（第4代或第5代）比例应该是1:2。小鼠胚胎成纤维细胞的冻存 重悬培养基： 80% DMEM 20% FBS 1% NEAA 冻存培养基： 60％ DMEM 30％ FBS 20％ DMSO 1、用不含钙镁离子的PBS洗一次细胞
注意观察你的培养瓶。 注释： 我们已用CF－1品系的鼠制备了成纤维细胞。 培养基成分： 88％ DMEM 10％ FBS 1％ NEAA 1% 双抗 对于新建立的细胞系，要对样本进行支原体检测。 小鼠胚胎成纤维细胞的消化/传代 1、移去MEF培养基 2、用5ml不含钙镁离子的PBS洗涤细胞（以去除胰蛋白酶的抑制物）。 3、每个培养瓶里加入1.5ml
，这发生在准备胚胎的第二天。这可能或早或晚发生，所以请注意观察你的培养瓶。 注释： 我们已用CF-1品系的鼠制备了成纤维细胞。 培养基成分： 88% DMEM 10% FBS 1% NEAA 1% 双抗 对于新建立的细胞系，要对样本进行支原体检测。 小鼠胚胎成纤维细胞的消化/传代 1、移去MEF培养基 2、用5ml不含钙镁离子的PBS洗涤细胞(以去除胰蛋白酶的抑制
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