白牦牛皮肤细胞；Yak-2说明书

白牦牛皮肤细胞；Yak-2说明书产品基本信息:
细胞名称 白牦牛皮肤细胞；Yak-2说明书
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞系来源于一雄性白牦牛的耳组织。2004年由中科院昆明细胞库建立。
培养条件 DMEM-H：
Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  
传代方法 1：
2传代；3-4天一次  
传代情况 P4
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　
支原体检测 荧光法（-）　
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
白牦牛皮肤细胞；Yak-2说明书培养方法：
收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况，如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。
培养实验又要开始了，科研工作者又该忙碌了，大家可能都在寻找适合自己的细胞，不用急，我们帮您掌舵，让您满意！
传代方法：细胞完全汇合时，倒掉旧液，加入消化液（0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA）2ml消化，显微镜下观察细胞完全脱离瓶壁分离成单个细胞后弃掉胰酶，加培养基混匀分瓶，T25瓶中加培养基至6-8ml，T75瓶加培养基至20ml，37℃，5%CO2孵箱培养。
白牦牛皮肤细胞；Yak-2说明书注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。
3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4.   静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7.该细胞仅供科研使用。

白牦牛皮肤细胞；Yak-2说明书培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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白牦牛皮肤细胞；Yak-2说明书SAG （5 mg）3-chloro-N-[trans-4-（methylamino）cyclohexyl]-N-[[3-（4-pyridinyl）phenyl]methyl]-benzo[b]thiophene-2-carboxamide； Smoothened Agonist； SAG
Sodium [4-amino-1-hydroxy-1-（hydroxy-oxido-phosphoryl）- butyl]phosphonic acid， trihydrate； MK-217； FosamaxAlendronate sodium
JW 55 （25 mg）N-[4-[[[[tetrahydro-4-（4-methoxyphenyl）-2H-pyran-4-yl]methyl]amino]carbonyl]phenyl]-2-furancarboxamide
Fluorescent Substrate for Thioredoxin V2 Assay （1 ea）Fluorescent Substrate for Thioredoxin V2 Assay
O6-Benzylguanine （1 g）NSC 637037； 6-（phenylmethoxy）-9H-purin-2-amine
Salubrinal （1 mg）（2E）-3-phenyl-N-[2，2，2-trichloro-1-[[（8-quinolinylamino）thioxomethyl]amino]ethyl]-2-propenamide； Salubrinal
Corey PG-Lactone Diol （500 mg）（3aR，4R，5R，6aS）-hexahydro-5-hydroxy-4-[（1E，3S）-3-hydroxy-1-octenyl]-2H-cyclopenta[b]furan-2-one； Corey PG-Lactone Diol
TBS-Corey Lactone Aldehyde （5 g）[3aR-（3aa，4a，5b，6aa）]-5-（tert-butyl-dimethylsilyl）hexahydro-2-oxo-2H-cyclopenta[b]furan-4-carboxaldehyde； TBS-Corey Lactone Aldehyde
G6PDH Assay Buffer （10X） （5 ml）G6PDH Assay Buffer （10X）
Fumonisin B2 （10 mg）1，1’-[（1S，2R）-1-[（2S，9R，11S，12S）-12-amino-9，11-dihydroxy-2-methyltridecyl]-2-[（1R）-1-methylpentyl]-1，2-ethanediyl]ester-1，2，3-propanetricarboxylic acid； Fumonisin B2