UE总RNA中量提取试剂盒

UE总RNA中量提取试剂盒
产品概述：
储存条件
Midiprep RNA column: 中量制备管。室温密闭贮存。
Lysate Filtration column: 过滤柱，用于DNA和蛋白质的去除。室温密闭贮存。
Buffer R-I : 细胞裂解液。 室温密闭贮存。
Buffer R-II : 中和液。 室温密闭贮存。
Buffer W1A concentrate: 洗涤液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。混合均匀，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。混合均匀，室温密闭贮存。
Buffer TE (nuclease-free): 洗脱液。10 mM Tris-Cl, 0.1 mM EDTA, pH 7.5。室温密闭贮存。



流程图
常见问题解答：

◆RNA提取得率低
·该组织或者细胞中RNA含量偏低
不同细胞和组织中RNA的丰度不同，如肝脏，胰腺，心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4 µg/mg)，脑，胚胎，肾脏，肺，胸腺，卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2 µg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05 µg/mg)。
·组织起始量太少或者太多
样品量过少，则细胞组织中RNA含量较低；样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力，裂解将不完全，从而导致RNA得率低。
·取样为上清液时，尽量吸尽上清（如细胞培养上清）。
·洗脱液温度过低
可以将洗脱液在65℃预热后使用。

◆OD260/OD280比值偏低
·蛋白质污染
在加入R-II中和离心后避免将沉淀物转移到RNA结合膜上。
·用水稀释样品
RNA应使用TE Buffer稀释后再进行吸光度值的测定，低离子强度或低pH值溶液会使OD280值升高。
·多糖或多酚的残留
一些特殊的组织和植物中，多糖、多酚含量较多，这些残留也会导
致OD260/OD280比值偏低。因此，从这类材料中提取RNA时，需要注意多糖、多酚杂质的去除。
·确定Buffer W1A和Buffer W2中加入的乙醇是否是100%无水乙醇/95%乙醇，加入体积是否正确。

◆RNA降解
·材料保存不当
使用的组织材料不够新鲜。提取RNA的组织材料应采用新鲜的组织材料，或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。绝不能未经液氮速冻而直接保存于-80℃冰箱中。
·裂解液用量不足
如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解样品，一定要使裂解液完全浸没样品。
·特殊材料
某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏，胸腺等)，即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮条件下将组织研碎，并且匀浆时使用更多裂解液。
·外源RNA酶的污染
试剂，器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统。
·内源RNA酶的污染
实验样品过多；匀浆时温度过高。

◆基因组DNA污染
·样品用量过多
样品用量超出了裂解液Buffer R-I的处理范围。请选择合适的样本处理量。
·样品中含有有机溶剂（如乙醇、DMSO等）
避免这些会引起裂解液性质改变的物质。
·加入Buffer R-II离心后，取上清时避免吸入沉淀。