UE miRNA小量提取试剂盒

UE miRNA小量提取试剂盒
产品货号: UE-MN-MiRNA-50/UE-MN-MiRNA-250
产品概述：
储存条件
Spin/vac mini column:小量制备管。室温密闭贮存。
Buffer R-I:细胞裂解液。室温密闭贮存。
Buffer R-II:中和液。室温密闭贮存。
Buffer TE (nuclease-free):洗脱液。10 mM Tris-Cl,0.1 mM EDTA, pH 7.5。温密闭贮存。



流程图


常见问题解答：

◆miRNA提取得率低
·该组织或者细胞中miRNA含量偏低
不同细胞和组织中miRNA的丰度不同，对于miRNA含量低的样本，可适当提高起始样本用量。
·组织起始量太少或者太多
样品量过少，则细胞组织中miRNA含量较低；样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力，裂解将不完全，从而导致miRNA得率低。
·取样为上清液时，尽量吸尽上清（如细胞培养上清）。
·洗脱液温度过低
可以将洗脱液在65℃预热后使用。
·miRNA富集失败
检查离心力是否达到要求；确定加入100%异丙醇沉淀miRNA

◆OD260/OD280比值偏低
·蛋白质污染
在加入Buffer R-II中和离心后避免将沉淀物转移到制备管上。
·用水稀释样品
miRNA应使用TE Buffer稀释后再进行吸光度值的测定，低离子强度或低pH值会使OD280值升高。
·多糖或多酚的残留
一些特殊的组织和植物中，多糖、多酚含量较多，这些残留也会导致OD260/OD280比值偏低。因此，从这类材料中提取miRNA时，需要注意多糖、多酚杂质的去除。

◆RNA降解
·材料保存不当
使用的组织材料不够新鲜。提取miRNA的组织材料应采用新鲜的组织材料，或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。绝不能未经液氮速冻而直接保存于-80℃冰箱中。
·裂解液用量不足
如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解样品，一定要使裂解液完全浸膜样品。
·特殊材料
某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏，胸腺等)，即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免miRNA的降解。更可靠的方法是：在液氮条件下将组织研碎，并且匀浆时使用更多裂解液。
·外源RNA酶的污染
试剂，器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统。
·内源RNA酶的污染
实验样品过多；匀浆时温度过高。

◆基因组DNA污染
·样品用量过多
样品用量超出了裂解液R-I的处理范围。请选择合适的样本处理量。
·样品中含有有机溶剂（如乙醇、DMSO等）
避免这些会引起裂解液性质改变的物质。
·加入Buffer R-II离心后，取上清时避免吸入沉淀。

◆下游RT-PCR失败
·乙醇残留
步骤9进行乙醇干燥不充分，有乙醇残留，从而抑制逆转录过程。