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文献和实验在无血清细胞培养条件下将人 iPS 细胞体外分化为结肠类器官
4+、c-Kit+、Sox-17+、PDGFR-和FOXA2+。 步骤2:后肠内胚层分化(第 4-8 天) 从培养箱中取出含有第 4 天定形内胚层培养物的 6 孔板。 从每个孔中吸出培养基。 用 3 mL 1X PBS 清洗每个孔。 在每个孔中加入 2 mL 预热的后肠诱导培养基(SCM303)。 立即将板转移到 37 °C ,5% CO2培养箱中 孵育24 小时。 重复步骤 2-5,共 5 天。 后肠内胚层分化的第5天是确定 CDX2 表达的关键时间点。CDX2 的表达必须 >60
。 密度过高也是很有害的。由于营养争抢,密度过高有可能导致局部细胞营养枯竭死亡。另外,高密度会导致细胞聚团,结果也是细胞不正常形态或者死亡,导致错误或失败的实验结果。 笔者的经验是6孔板每一个孔要有7×100 000 个正好(如果是台酚蓝染色只记录活细胞,那么酌情减少密度)。注意,注意!由于神经元的成熟速度和接种密度有很大关系,所以细胞计数一定要非常严肃认真!一定要所有格子都看!!如果发现计数板细胞不均匀,宁愿重新计数!由于接触抑制现象,适当密度的神经元可以抑制胶质细胞生长,从而达到理想
,则两线互相交叉;若两个抗原有部分相同成分a和ab,则两线除有相连部分以外还有一伸出部分。 三、器材 1%离子琼脂(配法见附录Ⅲ),兔抗马血清,马血清,牛血清,山羊血清,人血清; 方阵型打孔器或单孔金属管(孔径约3mm),吸管,毛细滴管,2.5×7cm载玻片、注射针头,含湿滤纸或湿纱布的培养皿或带盖搪瓷盒。 四、操作步骤 1.在沸水浴中溶解1%离子琼脂。 2.冷至50—60℃左右,吸3.5—
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