p35蛋白检测试剂盒

特别提示：包括p35蛋白检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：p35蛋白检测试剂盒
英文名称：p35 Detection Assay(Western Blot)
产品货号：KFS239
产品规格：50T

本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液LysisBuffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究（本试剂盒包含兔抗p35抗体），但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。

除了p35蛋白检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：PMSF(100mM)(苯甲基*酰氟)
货号：YT615
规格：10ml
本品用于抑制蛋白酶，是常用的蛋白酶抑制剂。第一次使用时把一管PMSF晶体全部倒入到PMSF溶剂中，溶解混匀，即配制成10毫升100mM PMSF。

产品组份：
PMSF(晶体)————可以配制10毫升100mMPMSF
PMSF(溶剂)————10ml

分子式：C7H7FO2S
分子量：174.19
纯度：＞99%
储存条件：室温

名称：细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
货号：SNM414
规格：50T

名称：考马斯亮蓝G250蛋白快速染色液
货号：SNM445
规格：250ml

名称：BCIP/NBT显色试剂盒
货号：SNM478
规格：1

名称：5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(还原)
货号：RFT071
规格：10×1ml
本品是以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有DTT，可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

产品特点：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本试剂含有DTT，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、将5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (还原)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于95℃中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。
5、进行常规电泳，通常染料到达距离凝胶底端0.5-1 cm处即可停止电泳。

储存条件：-20℃。

名称：SDS裂解液
货号：SY0317
规格：100ml
SDS裂解液是以SDS为主要组分的裂解液，具有较强的裂解强度，另含有sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、ChIP等实验。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

注意事项
1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

(一) 细胞样品
1）融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加200μl裂解液。

（二）组织样品：
1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。