pFastBacHTA昆虫胞内质粒

质粒构建及提取概述

-GFP 等）以及其他应用的质粒。根据质粒的拷贝数不同，又可以分为高拷贝质粒（质粒可以在细胞内复制成几百个拷贝）和低拷贝质粒（质粒在细胞内只有＜20 个拷贝）。质粒的拷贝数通常受到复制子的调控。 质粒上通常会带有多种元件，例如，复制起始位点（ORI），抗性基因，多克隆位点，启动子，终止子，标签序列等等。质粒上至少要带有复制位点（ORI），否则无法进行复制；除了一些特殊质粒（如 minicircle plasmid）之外，绝大多数质粒都带有抗性基因，用于抗生素筛选。多克隆位点可以通过酶切，酶连或者同源

植物基因转化常用方法

一. 植物遗传转化的方法 植物遗传转化技术可分为两大类：一类是直接基因转移技术，包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、PEG介导转化方法等，其中基因枪转化法是代表。另一类是生物介导的转化方法，主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法，其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物的遗传转化。二.农杆菌介导的基因转化方法 （一）农杆菌的Ti质粒与T-DNA 的整合机制几乎所有双子叶植物都容易受到土壤农杆菌感染，而产生根瘤。它是一种革兰氏阴性土壤杆菌

Nature：哈佛大学董民团队利用昆虫细胞全基因组 CRISPR 筛选，揭示杀虫毒素受体

细菌蛋白毒素是很多致病菌的主要武器，例如白喉毒素，炭疽毒素，肉毒杆菌毒素等等。近年来，全基因组 CRISPR/Cas9 筛选技术在哺乳动物细胞上得到广泛应用，成为研究这些针对人和动物的毒素和病原菌的主要实验方法。昆虫是地球上种类最繁多的动物，在整个生态链上起到至关重要的作用。在自然界中，存在许多专门靶向昆虫的细菌蛋白毒素， 有些已经被广泛地应用于农业害虫防治 。 现有的 CRISPR-Cas9 筛选技术依赖针对哺乳动物细胞的慢病毒转染系统，不适用在昆虫细胞上，大大限制了人们对针对昆虫的蛋白