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- 2025年07月10日
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大量
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12个月
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江西江蓝纯生物试剂有限公司
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RT
产品简介：
上个世纪70年代，Kristensopn和Olsson报道了HRP可神经末梢摄取，经轴浆逆行运输至神经元胞体，经组织化学方法可显示出神经元的轮廓，从而开发出HRP追踪神经元示踪技术，即为HRP法。DAB即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下, DAB会产生棕色沉淀，该棕色沉淀不溶于水和乙醇，显色后呈棕色，可在显微镜下观察。
神经HRP示踪显色液(DAB法)是动物经麻醉、注入HRP后，游离或络合型的HRP与氧化剂反应生成络合物，该络合物氧化供氢的DAB显色剂，呈棕色，在显微镜下清晰可见。该显色液仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
神经HRP示踪显色液(DAB法)
注意事项：
如果出现高的反应背景或沉淀，表明DAB底物反应过于强烈。
所用器皿必须洁净，避免含有氧化剂或还原剂，否则会产生非特异性反应。
DAB显色液避免反复冻融，以免显色效率下降。
DAB增强剂注意密闭保存，否则显色效率下降。
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文献和实验过氧化物酶 DAB 法 过氧化物酶(peroxidase)与细胞 色素氧化酶具有相似的化学本质，是一类氧化还原酶，可使过氧化氢(H2 O2 )分解生成水和释放氧。过氧化物酶广泛分布于乳腺、甲状腺、唾液腺、肠上皮、血细胞和肥大细胞等。存在于细胞过氧化物酶体中，是机体的抗氧化酶，在防止氧代谢物损伤中具有重要作用。显示过氧化物酶常用联苯胺法。联苯胺如DAB和四甲基联苯胺(3，3，5，5，―tetramethyl benzidine,TMB)能被过氧化物酶分解过氧化氢产生的氧所氧
因为要用神经逆行示踪剂，文献中提到比较多是固蓝，英文名字fast blue，于是就购买了，但不是我经手买的，买的是fast blue bb salt，和另外一种示踪剂碳化青（DiI），一同使用。使用中发现，后者很好溶解，用来标示神经效果很好，但是这个固蓝，一是溶解不了，用文章中提到的双蒸水、酒精、DMSO都不行，二是不能激发荧光，即使是新拿出来的颗粒，放在荧光显微镜下也是什么都没有。回头再查，发现，固蓝有很多种类，包括固蓝
化物酶，然后用PBS洗涤三次，每次 5min。4 ） 加入一抗（用3%BSA-PBS封闭液1:50稀释一抗），37℃湿盒孵育1h。5 ） 加入Post-blocking室温湿盒孵育30min,然后用PBS洗涤三次，每次5min。6 ） 加入稀释好的辣根过氧化物酶（HRP）标二抗，室温下湿盒孵育30min。7 ） 用PBS洗涤玻片5次，每次5min。8 ） 按照DAB试剂盒说明添加显色液，避光显色30s-5min。用蒸馏水终止显色反应。9 ） 苏木精进行复染色3min,用蒸馏水冲洗。10
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