人肺微血管内皮细胞(HPMEC)

人肺微血管内皮细胞(HPMEC)（详细信息）
传授人肺微血管内皮细胞(HPMEC)细胞培养                                
 细胞培养基本方法
【产品来源】    细胞主要来源ATCC、ScienCell、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
细胞复苏步骤
一、所需仪器：
离心机
生物安全柜
电动移液器
CO₂培养箱
倒置显微镜
液氮罐
恒温水浴锅

二、所需试剂：
胎牛血清（FBS）
无菌1×PBS pH=7.2
完全培养基

三、所需耗材：
离心管（15ml、50ml）
T-25细胞培养瓶
一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）


四、操作步骤：

1. 将恒温水浴锅中的水预热到37℃；
2. 从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入恒温水浴锅中复温，工程中需要不断震荡冻存管以提高复温速率；
3. 将融化了的冻存管中的用移液管转入一直装有5ml完全培养基的15ml离心管中，充分混匀后，300g离心5min；

离心完成后弃去上清，用1ml完全培养基重悬细胞后，转入T-25细胞培养中，再加完全培养基4ml，之后转入CO₂培养箱中培养静置。 
细胞冻存步骤
一、所需仪器：
-86℃超低温冰箱
离心机
生物安全柜
电动移液器
CO₂培养箱
倒置显微镜
液氮罐

二、所需试剂：
胎牛血清（FBS）
细胞培养级DMSO
冻存液：80%FBS+20%DMSO
无菌1×PBS pH=7.2
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
isopropanol
三、所需耗材：
离心管（15ml、50ml）
T-25细胞培养瓶
一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）
1.8ml冻存管
程序降温盒

四、操作步骤：

1. 将需要那冻存的细胞从CO₂培养箱中取出，在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，吸弃瓶内的培养基；
2. 向培养内加入无菌1×PBS 3ml，之后水平放置培养瓶，旋转震荡培养瓶，使PBS能够浸润到培养平面上所都的面积，吸弃PBS；
3. 重复步骤2一次，之后向瓶内加入消化液1ml，轻微震荡后放入37℃CO₂培养箱中孵育2-4min；
4. 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，如还有部分细胞为消化下来，可在生物安全柜内用移液管吸起消化液，吹打培养平面；
5. 向消化下细胞的培养瓶中加入1ml含血清的完全培养基终止消化，然后将培养瓶中的液体转入15ml离心管中，300g离心5min；
6. 离心完成后，弃上清，用0.5mlFBS重悬细胞，再加入0.5ml冻存液，用移液管充分混匀，之后转入1.8ml冻存管中；
7. 将冻存管转入填充满isopropanol的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

8.第二天，取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存。

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