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上海晶抗生物工程有限公司
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低温避光
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100ml
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文献和实验Na2EDTA•2H2O,用NaOH调pH至8.0(约需2 g 左右的固体NaOH),溶解后定容至100 ml。(6)GUS酶提取液:0.1 M 磷酸缓冲液(pH7.0)取50 ml;10% SDS取1 ml; 0.5 M EDTA(pH8.0)取2 ml;Triton X-100取100 ul;β-巯基乙醇100 ul;用水定容至100 ml。(7)MUG底物:称8.8 mg MUG,溶于10 ml GUS酶提取液中,配制成2 mmol/L 的工作浓度。(8)反应终止液(0.2 mol/L Na
粉末,此粉末即为丙酮粉。 2.酶液制备:称取1g丙酮粉,加入20ml 0.025mol/L磷酸缓冲液 ( pH7.2),0℃下用磁力搅拌器匀浆30min,在12 000rpm下离心30min,取上清液,得粗酶提取液。 (2)多酚氧化酶(PP0)的纯化 向上述酶液中加入NH4SO4至为80%饱和溶液, 搅拌30min, 过夜,于12 000g离心30min,沉淀溶于0.025mol/L磷酸缓冲液 中(pH7.2), 对10mmol/LTris-HCl溶液(pH
与003M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%聚乙烯吡咯烷酮)混合,匀浆4层后纱布过滤,滤液以6000rpm离心10min,弃除沉淀获得酶提取液。 2:盐析分级沉淀: 在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),然后6000rpm离心20min弃除沉淀;离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),再以6000rpm离心20min,弃除上清夜,收集粗酶沉淀。 四、实验结果 获得PPO粗酶液。
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