硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(微量法)

特别提示：包括硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(微量法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(微量法)
产品货号：SK028-1
产品规格：100管/48样

测定意义:
TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TPX普遍存在于各种生物体内，酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫甚至细菌和古细菌体内都含有该酶，在进化上高度保守。TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。

测定原理：
TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇(DTT)，H2O2的吸收波长为240nm，通过测定240nm波长处吸光度的下降速率，即可计算出TPX活性。

实验中所需仪器及设备：
紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、3ml石英比色皿、双蒸水

除了硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(微量法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：α1微球蛋白测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
货号：SNM268
规格：R1：40ml×1 R2：10ml×1
检测指标：α1微球蛋白;α1-MG

名称：甲胎蛋白测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
货号：SNM271
规格：R1：40ml×1 R2：10ml×1
检测指标：甲胎蛋白;AFP

名称：活化部分凝血活酶时间)测试盒(鞣花酸/半自动凝血仪)
货号：SNM285
规格：2ml×10
检测指标：活化部分凝血活酶时间;APTT

名称：葡萄糖测试盒(手工/半自动)
货号：SNM287
规格：4×50ml
检测指标：葡萄糖;Glu

名称：谷氨酸检测试剂盒(比色法)
货号：HR8721
规格：100T

名称：过氧化氢酶检测试剂盒(荧光法)
货号：HR8724
规格：100T

名称：血浆活性氧检测试剂盒
货号：HR8801
规格：100T/200T

名称：组织活性氧(ROS)检测试剂盒
货号：HR8822
规格：100T

名称：过氧亚硝基阴离子(ONOO-)检测试剂盒
货号：HR8843
规格：100T/200T
过氧亚硝基阴离子(ONOO-，Peroxynitrite anion)是活性氧家族的一员，活性氧(Reactive oxygen species,ROS) 包括过氧化氢(H2O2，Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH，Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2，Singlet oxygen)、一氧化*(NO，Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ，hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-，Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2·-)。超氧阴离子遇水生成H2O2，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH·，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。
过氧亚硝基阴离子(ONOO-)检测试剂盒是一种利用荧光探针O31进行过氧亚硝基阴离子检测的试剂盒。O31探针本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，在过氧亚硝基阴离子存在的条件下，O31探针被氧化生成荧光物质O31F，O31F的绿色荧光强度与细胞内过氧亚硝基阴离子水平成正比，检测O31F绿色荧光就可以知道细胞内过氧亚硝基阴离子的水平。
在激发波长488 nm，发射波长516 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测O31F荧光，从而测定细胞内过氧亚硝基阴离子水平。
O31荧光探针对过氧亚硝基阴离子(ONOO-)有较高的选择性，但是也会与活性羟基反应。
本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。我公司可以提供针对各种类型活性氧、活性氮的检测试剂盒。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：六个月。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。
检测方法：
流式细胞仪
荧光显微镜
激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞
● 贴壁细胞
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长488 nm，发射波长515 ±5 nm。或者按照FITC荧光检测条件检测。● 离心机 ● 移液器 ● 冰箱 ● 冰盒
试剂：
● PBS缓冲液(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液) ●或者HBSS
耗材：
● 离心管 ● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
●对于药物作用时间较短(小于2小时)的细胞，可以先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用相应的药物刺激细胞，后标记探针。
● O31染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● 酚红对O31荧光探针的检测有干扰，需避免。
●染色后立即进行分析。
● 以下步骤仅做为参考，稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如，对于某些细胞，如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱，可升高O31探针浓度，以提高检测的灵敏度。另外，探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整，孵育温度在4℃-37℃内调整。

1．探针染色工作液配制： 根据样本数量，用HBSS将 O31荧光染料100倍稀释，配制成染色工作液。【注】:
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或PBS稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度100-1000倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和线粒体毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外，浓度过高也可能造成非特异性染色，对其他细胞结构进行染色。
● 工作液现配现用。
2．细胞探针标记
2.1对于贴壁细胞，可以进行原位标记
1)培养皿/培养板准备细胞样本。
2)待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育20分钟～30分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
【注】:
● 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
3)移除染色液，用PBS(pH7.4)洗涤细胞3次。
【注】:
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)荧光显微镜(含合适滤片)或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。最大激发/发射波长为488 / 516nm。 2.2对于悬浮细胞
1)离心，吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液100-200μl重悬细胞，于生长状态下孵育20分钟～30分钟(具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
3)离心，吸除染色液，加入PBS(pH7.4)重悬细胞，洗涤3次。
4)流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为488/516nm。
【注】:
●对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
● 如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前可以先用多聚赖氨酸(poly-D-lysine)包被载玻片或盖玻片。
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
3．检测：对于原位标记探针的样品可以用荧光显微镜，激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察亦可。
使用488nm激发波长，516nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。O31F的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置进行检测。