RNase抑制剂(鼠源)

特别提示：包括RNase抑制剂(鼠源)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNase抑制剂(鼠源)
英文名称：Murine RNase inhibitor(40U/μl)
产品货号：SY0266
产品规格：2KU

RNase抑制剂（RNase inhibitor）是人的胎盘中存在的一种特异性核糖核酸酶(RNase)抑制剂，能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体从而使RNase失活。该产品是以可溶形式在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源RNase抑制剂，能够广泛抑制各种RNase (RNase A, B, C)，此外经过RT-PCR、RT-qPCR检验，本品能与Reverse Transcriptase、M-MLV (H-) Reverse Transcriptase以及各种DNA Polymerase兼容。与人源RNase inhibitor相比，本品不含人源蛋白中的两个对氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性，且更加适合于对高DTT敏感性实验 (如qPCR)。

该产品可用于cDNA第一链合成、多核糖体的分离(Polysome isolation)、体外转录和体外无细胞翻译系统。

活性定义：抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位 (U)。RNase A 的活性通过水解Cyclic 2, 3-CMP 生成3-CMP定量求得。

质量控制：
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测：50 μl体系中，加入200 U本品，以ddH2O为模板，扩增E. coli 16 s rDNA基因。35个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

储存条件：-20℃，有效期2年。

应用实例

1.在RNase free离心管中配制如下混合液：

RNase free ddH2O	to 20μl
5×Buffer	4μl
Oligo (dT)18 (50 μM)	1μl
dNTP Mix (10 mM each)	1μl
RNase Inhibitor (40 U/μl)	1μl
Reverse Transcriptase (200 U/μl)	1μl
模板RNA	10 pg-2.5 μg

2.轻轻混匀。
3.50℃ 45min, 70℃ 15 min。
4.产物于-20℃保存。

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）抑制RNase活性的pH值范围较广，在 pH 7～8时表现zuì大活性。
3）起泡或剧烈搅拌 (Vortex等)会引起失活。
4）不抑制RNase H活性。

除了RNase抑制剂(鼠源),，我公司还供应以下相关产品：



名称：一管式病毒RNA提取试剂盒
货号：BTN3073
规格：100次
本试剂盒是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床RT-PCR检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。

产品特点：
1. 回收率达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高，RT-PCR检测到的zuì终灵敏度可以达到50-100拷贝/mL(对HIV和HCV)。
3.一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
4. 无毒环保，不需要使用*酚和氯*等有毒的有机溶液。
5.可放量，如果加上病毒离心富集步骤，每管zuì多可以处理样品1.5mL。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制备血浆的全血在2-25℃放置的时间不能超过6小时，在此时间内，可以室温800-1600g离心20分钟，上清即为血浆。
3. 血浆可以在2-8℃或更低温度下运输，可以在室温放置一天，2-8℃放置5天，-20℃以下长期保存。
4. 血浆zuì好按0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。
5. 实验前所有试都必须放置在室温。
6. 实验当天新鲜配制70%的乙醇。

二：病毒提取操作
1. 标记1.5-2mL螺旋盖塑料离心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006)，为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。注意设置阳性和阴性对照。
2. 每管(包括正负对照管)中加入0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液(需提前融化)。
3.快速震荡样品几秒，再短暂离心，取0.2mL液体样品加入到已经装有0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液的管中。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体样品在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL上清后在取用样品。
4.在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
5.室温放置10分钟。此间可以在每个管上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
6. 振荡数秒后加入0.7mL室温*丙醇，旋紧盖后振荡30秒混匀，把离心管的向心面对向转头的中央，13,000-15000g室温离心至少15分钟。
7.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时可能看不见)。
8. 加入1.0mL室温70%乙醇，振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
9.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
10. 再短暂离心数秒，用移液器移弃残留液体(70%乙醇)，否则它会影响后续反应。
11. 加入200μl RNase-free水或百奥莱博的1×液相RNase Scavenger(能灭活残留的RNase，而RNase-free水无此功能)，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状RNA沉淀，溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA，所以不要离心后取上清使用，必须取混合液使用，哪怕很浑浊。
12. 直接取适量用于RT-PCR，如果溶于200μl水,同时样品使用量不超过RT-PCR体系的1/2，不溶物一般不会影响RT-PCR。剩余样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。

疑难解答：
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒zuì多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个RNA分子)，同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下)，样品中病毒数往往也不是很多，使得样品中核酸的绝对量几乎是微乎其微，十分容易丢失。另外，由于得到的核酸量少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而病毒RNA往往具有稳定的二级结构，进一步增加了鉴定的难度(即不知道是RNA提取的问题还是RT-PCR的问题)。
Q：如何判断是病毒RNA没提取出来还是提取出来了但没有RT-PCR成功？
A：在RT-PCR反应中加阳性和阴性对照。