胃蛋白酶水溶液(0.4%)

在热诱导抗原修复法出现之前，胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶等酶类的诱导的表位修复是常用的方法。胃蛋白酶水溶液(0.4%)能暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理，抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时，可考虑进行抗原修复。按照每个片子需要10ml抗原修复液(1×)计算，100ml抗原修复液可以用于10个样本的抗原修复。

组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。柠檬酸盐、EDTA或Tris等缓冲液在热的条件下可以使被福尔马林屏蔽的抗原重新暴露出来，同时又不会对抗原表位造成破坏，从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高诊断的准确率。

自备材料：
系列乙醇
双蒸水或去离子水
加热设备
免疫染色洗涤液
 
注意事项：
胃蛋白酶水溶液(0.4%)恢复至室温后再使用，但应避免反复冻融。
浸泡在胃蛋白酶水溶液(0.4%)，佳孵育时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片
1、脱蜡至水
①二3次，每次3～5min。
②无水乙醇脱水2次，每次3～5min。
③95%的乙醇，3～5min。
④90%的乙醇，3～5min。                              
⑤80%的乙醇，3～5min。                            
⑥70%的乙醇，3～5min。                             
⑦蒸馏水冲洗2次，每次3～5min。                      
2、抗原修复：将切片浸泡在胃蛋白酶水溶液(0.4%)中，37℃孵育10～25min。
3、免疫染色洗涤液或自来水洗涤1～2次，每次3～5min，彻底漂洗干净。
4、进行后续的免疫染色步骤。
(二)冰冻切片： 
1、免疫染色洗涤液或自来水洗涤切片5min。
2、抗原修复：将切片浸泡在胃蛋白酶水溶液(0.4%)中，37℃孵育10～25min。
3、免疫染色洗涤液或自来水洗涤1～2次，每次3～5min，彻底漂洗干净。
4、进行后续的免疫染色步骤。
(三)其它样品：
其它样品参考石蜡切片或冰冻切片进行操作。