- ￥131
- gelatins
- 进口，国产
- JC7071
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃
- 库存：
大量
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
100ml
组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。柠檬酸盐、EDTA或Tris等缓冲液在热的条件下可以使被福尔马林屏蔽的抗原重新暴露出来，同时又不会对抗原表位造成破坏，从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高诊断的准确率。
自备材料：
系列乙醇
双蒸水或去离子水
加热设备
免疫染色洗涤液
注意事项：
浸泡在抗原修复液(1×)中，佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片
1、脱蜡至水
①二3次，每次3～5min。
②无水乙醇脱水2次，每次3～5min。
③95%的乙醇，3～5min。
④90%的乙醇，3～5min。
⑤80%的乙醇，3～5min。
⑥70%的乙醇 ，3～5min。
⑦蒸馏水冲洗2次，每次3～5min。
2、抗原修复
①用去离子水或双蒸水稀释通用强力抗原修复液(10×)至1×。
②将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95℃或沸水加热约10～30min。
③抗原修复液(1×)使用前需预热到95～100℃。如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20～30min内冷却至室温。
3、免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。
4、进行封闭等后续的免疫染色步骤。
(二)冰冻切片
1、用去离子水或双蒸水稀释通用强力抗原修复液(10×)至1×。
2、免疫染色洗涤液洗涤切片5min。
3、将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95℃或沸水加热约10～30min
4、抗原修复液(1×)使用前预热至95～100℃。如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20～30min内冷却至室温。
5、免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。
6、进行封闭等后续的免疫染色步骤。
(三)其它样品
其它样品参考石蜡切片或冰冻切片进行操作。
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文献和实验抗原修复方法 Antigen Retrieval Methods
考虑人为染色的可能性。由于染色在任何给定的实验中都受多种变量的影响，因此应使用对照来验证特异性抗体结合。 R&D Systems 提供多种试剂，可提高组织抗原检测率并增强免疫反应性。在初始优化阶段，研究人员可将经中性 pH 7.0 通用抗原修复液（产品编号：CTS015）处理的样本与未经抗原修复的相同组织切片进行比较。根据组织的不同，可能需要使用酸性或碱性抗原修复液进行后续测试。R&D Systems 发现，使用碱性抗原修复试剂（产品编号：CTS013）进行处理通常效果良好。我们还提供酸性（产品
一、SP 法 1）脱蜡、水化；2）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；3）3% H2O2（80% 甲醇）滴加在 TMA 上，室温静置 10 分钟；4）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；5）抗原修复；6）PBS 洗 2～3 次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗 50μl，室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9）4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10）PBS 洗 3 次各 5 分钟；11）滴加 Ⅱ 抗 40～50 μl，室温
不完全：使用正常山羊血清或 1%～5% BSA 封闭 1h。 （5）离子相互作用造成的背景：降低抗体稀释液的离子强度。 （6）切片或细胞过于干燥或孵育温度过高：实验过程中请保持切片处于湿润状态，一抗孵育时尽量使用 4℃ 过夜孵育。 （7）内源性过氧化物酶残余：适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 （8）样本于缓冲液或抗原修复液中浸泡太久：样本在溶液中浸泡时间不要超过 24h。 Q4：为什么会出现非特异性染色，如何避免？ （1）抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加非特异性染色：由于本试剂盒使用
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