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上海研生
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免疫沉淀和免疫共沉淀检测服务
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如何保证生化检测结果的准确:
1. 室内质控:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;
2.谨慎使用检测方法学:
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
3.仪器因素:
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题。
4.标本状态:
避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验血清中有免疫复合物存在时,可与其本身的C1(内源性C1)结合。将被检血清56℃加热1h,能破坏结合的C1,空出补体结合位点。当加入豚鼠血清(外源性C1)及指示系统(致敏SRBC)时,CIC又可与外源性C1结合,使致敏SRBC的溶血被抑制。1、试剂(1)缓冲生理盐水 NaCl l7.00g,NaaHP04 1.13g,KH2P04 0.27g,蒸馏水溶解至100ml。用时取此液5mL,加蒸馏水95ml,10%硫酸镁0.1ml当日使用;(2)溶血素 按效价以缓冲盐水稀释至2单位;(3)2%SRBC
活性较C4A高,先发生溶血反应,因此可用此法将不易区别的C4A与C4B区分开来。 2、主要试剂 R4豚鼠血清的制备:取正常豚鼠血清lmL加0.16mol/L的水合肼0.1mL,37℃2h。 3、操作步骤 (1)取SRBC5mL用生理盐水洗3次,用GVB2+配成10%的浓度; (2)取5mLl0%SRBC加50gL0.2mol/LEDTA和5mL 6U的溶血素混合,37℃30min。注意应经常摇匀,使抗原与抗体分子充分接触,然后用生理盐水洗2次,GVB2+洗1次; (3)根据凝胶板的大小做一个
将豚鼠血清用水合肼或氨水处理去除其中的C4,这种C4缺乏血清(简称R4)不能使致敏的SRBC溶解,当加入含有C4的受检血清后,级联酶促反应发生即可导致致敏的SRBC溶解。溶血的程度与待测血清中C4的活性相关。1、无补体C4-抗原抗体复合物(EAR4)的制备 在新鲜豚鼠血清中按每ml加0.15mol/L氨水0.25ml或0.75mol/L水合肼0.25ml,混合后置37℃水浴30~90min,灭活其中的C4。用1mol/LHCl调节至pH7.2备用,取5%SRBC悬液与等体积4U溶血素混合
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