蛋白银染试剂盒

蛋白银染试剂盒(Protein Silver Stain Kit)是一种比较快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。其优点还在于：1、操作简单、快速；2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质朴检测；3、目的条带清晰；4、不含。Protein Silver Stain Kit与Protein Fast Silver Stain Kit相比，前者检测灵敏度更高，尤其是在检测小分子量蛋白质的时候，但后者操作速度更快。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
水平摇床或侧摆摇床
去离子水(超纯)、乙醇、冰乙酸
 
操作步骤(仅供参考)：
准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是25～50ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程均应在摇床上持续摇动进行，摇床转速控制在60～70rpm。提前配制固定液，固定液A按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制，固定液B按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=1:1:18的比例配制。
水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中，摇床上清洗2次，每次5min。
3、固定：弃液，取凝胶放入50～100ml固定液A中，在摇床上室温摇动1h；取凝胶放入50～100ml固定液B中，在摇床上室温摇动2h至过夜；取凝胶放入50～100ml去离子水中，在摇床上室温摇动5min；取凝胶放入25ml1×Silver Fixaton buffer中，在摇床上室温摇动30min。(1×Silver Fixaton buffer，即取Silver Fixaton buffer (5×)5ml加入到20ml去离子水中，混匀，即1×Silver Fixaton buffer，一般应24h内用完。)
4、水洗：弃固定液，取凝胶放入50～100ml去离子水中清洗32次，每次10min。
6、增敏：弃液。配制银染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer 5×)5ml加入到20ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Sensitizer，一般应2h内用完。室温下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2次，每次30min。立即用去离子水清洗凝胶4次，每次15min。
7、银染：配制银染工作液，即取1ml Silver Stain Enhancerl加入到24m Silver Stain中，混匀，即得银染工作液，一般应2h内用完。取凝胶入银染工作液，在摇床上室温摇动30min。
8、水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶4次，每次4min。
9、显影：配制银染显影工作液，即取Silver Stain Developer(5×)5ml加入到20ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Developer，一般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于1×Silver Stain Developer中，室温孵育5～10min，直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影2～3min，亦可延长至5min以上，如果显影效果不佳，可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。