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5min TA/Blunt-Z
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大量
5min TA/Blunt-Zero Cloning Kit
上海信裕生物科技有限公司
25 rxn/50 rxn
兼容性强
图A 图B
图A:TA-Zero Cloning
1. 将Taq酶(如Vazyme的Taq系列)的扩增产物(3’端带A)加入到5 × TA/Blunt-Zero Cloning Mix中,室温反应5 min。
2. Mix中的平末端化因子将Taq酶扩增产物末端的A碱基去掉,形成平末端化产物。
3. 平末端化产物5’-OH进攻TOPO酶与载体之间的磷酸键,TOPO酶被释放出来,载体与平末端化产物形成环形重组子。
图B:Blunt-Zero Cloning
1. 将高保真酶(如Vazyme的Phanta系列)的扩增产物(平末端)加入到5 × TA/Blunt-Zero Cloning Mix中,室温反应5 min。
2. 平末端产物5’-OH进攻TOPO酶与载体之间的磷酸键,TOPO酶被释放出来,载体与平末端化产物形成环形重组子。
简单快速:
Mix+PCR产物,混匀,离心室温反应5 mins
转化涂板
推荐使用Vazyme#C505,即Fast-T1 competent cell,冰浴5 min后,可直接涂氨苄培养板。整个连接转化过程10 min。
克隆效率高:
对不同插入片段进行测试并与与竞品比对,克隆数统计:(个)
TA连接测试:
50 bp
0.5 kb
1 kb
2 kb
3 kb
4.5 kb
Vazyme
100
600
3200
2000
320
400
Supplier T
70
900
280
290
80
平末端连接测试:
150
1800
4500
1200
650
90
1500
2500
1000
800
阳性率高:使用插入片段为1kb,转化后随即挑取单克隆进行菌落PCR鉴定,Marker为诺唯赞DL5000 DNA marker(MD104),
测试结果阳性率为100%
本产品是第二代TOPO克隆试剂盒,包含第二代Topoisomerase、含有自杀基因ccdB的载体以及平末端因子。使用第二代Topoisomerase,配合最适的buffer,活性更高,进一步提高克隆效率,室温5 min完成高效连接。使用含有自杀基因ccdB的载体,当插入片段与载体成功连接时,破坏ccdB正确表达,宿主细胞能够正常生长,否则宿主细胞不能正常生长,从而实现“Zero”背景。添加平末端化因子,使得本产品能够同时兼容TA克隆与平末端克隆。
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