SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)

本试剂为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS，使用时不用另外加入。

自备材料：
1、 凝胶模具
2、 Acr-Bis(30%,29:1)
3、 10%APS
4、 TEMED
5、 蒸馏水
 
操作步骤(仅供参考)：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，佳胶浓度请参考附表1。
(一)灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配凝胶模具。(注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。)
2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、分离胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端
1.5 cm或距梳齿约0.5cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1～2cm的水层，
使凝胶表面保持平整。
6、 静置30～60min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
 
(二)灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混
合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20min，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
 
注意事项：
1、 配制成10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用2~3次，剩余的弃用，亦可4℃保存几天。
2、 TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、 配制聚凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于37℃放置，加速凝固。
4、 Acr-Bis(30%,29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。